Obtenção de peptídeos recombinantes com potencial aplicabilidade para imunodiagnóstico de Hepatite B e Hepatite C através da técnica de Phage Display

Orientador: Prof. Dr. Marco Aurélio KriegerCo-orientadora : Prof. Dra. Daniela Parada PavoniDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduaçao em Processos Biotecnológicos. Defesa: Curitiba, 23/02/2011Bibliografia: fls. 134-139Resumo: O Ministério da Saúde tem a hemovigilância como uma de suas áreas estratégicas de atuação, com o objetivo de direcionar ações visando reduzir os incidentes transfusionais, dentre os quais, devido à gravidade, podemos destacar: infecção por HBV/Hepatite B e infecção por HCV/Hepatite C, que totalizam 350 e 170 milhões de pacientes crônicos no mundo, respectivamente. Portanto, é obrigatória a realização de exames laboratoriais de alta sensibilidade para detecção destes patógenos, em todas as doações, sendo que o sangue e seus derivados não podem ser transfundidos antes da obtenção de esultados finais de triagem não-reagentes. Estima-se que o mercado mundial de kits de diagnóstico movimente cerca de 25 bilhões de dólares anualmente e o Brasil, em particular, estima-se possuir um saldo comercial negativo em reativos de diagnóstico da ordem de 200 milhões de dólares, explicitando a alta dependência do país por importações para suprir a demanda interna de diversos programas de saúde ública. Com base nestes dados, o presente trabalho foi desenvolvido para a triagem de três bibliotecas comerciais (Ph.D. 7, Ph.D. 12 e Ph.D. C7C, New England Biolabs) construídas pela técnica de Phage Display para a obtenção de peptídeos recombinantes com potencial aplicabilidade no imunodiagnóstico de hepatite B e hepatite C. Após a realização de três ciclos de seleção (bio-panning), foi realizado o seqüênciamento dos peptídeos obtidos e, através da análise dos mesmos por ferramentas de bioinformática e da realização de estudos de afinidade por ensaios imunoenzimáticos, foi possível selecionar três peptídeos de potencial aplicabilidade para testes de imunodiagnóstico do vírus da hepatite B e dez para o vírus da hepatite C.Abstract: Aiming to direct actions in order to reduce post-transfusional incidents, such as hepatitis B and C viruses infection (which total 350 and 170 million chronic patients in the world, respectively), the Brazilian Ministry of Health has hemovigilance as one of its strategic areas of action. Therefore, it is mandatory to carry out laboratory tests of high sensitivity for the detection of these pathogens in all donations and the blood and its derivatives can not be transfused prior to obtaining final results of non-reactive screening. It is estimated that the worldwide market for diagnostic kits moves around 25 billion dollars annually and Brazil in particular, is estimated to have a negative trade balance in diagnostic reagents of 200 million dollars, which results in a high national dependence on imports to meet Brazilian demand for many public health programs. Based on these data, this work was developed in order to obtain recombinant peptides with potential applicability in the immunodiagnosis of hepatitis B and hepatitis C through the screening of three commercial libraries of random peptides (Ph.D. 7, Ph.D. 12 e Ph.D. C7C, New England Biolabs) constructed using the Phage Display technology. After performing three rounds of screening (bio-panning), all peptides screened were sequenced and the data obtained was analyzed by bioinformatics tools and immunoassays affinity studies. As a result, it was possible to select three peptides with potential applicability in immunodiagnostic tests for hepatitis B virus and ten peptides for hepatitis C virus testing