Mineralização dentinária in vitro

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas MonizO estudo do osso e dos dentes nos mamíferos num contexto de biomimética da mineralização é particularmente interessante pelo elevado impacto que pode representar nas terapias e estratégias de reparação ou regeneração de tecidos humanos mineralizados. Os cristais de origem biológica, designadamente na dentina, são tipicamente formados numa matriz orgânica extracelular, constituída maioritariamente por colagénio tipo I. Sendo assim o presente trabalho teve como objetivo o de analisar o efeito da presença de agentes mineralizantes de uso clínico em restaurações e proteções pulpares ProRoot MTATM e RecaldentTM CCP-ACP, no padrão de mineralização in vitro, na presença de colagénio por meio de microscopia eletrónica de varrimento e EDS Para tanto, foram preparados três grupos experimentais, em triplicados, sendo que o Grupo A consistiu em uma solução de colagénio a 2mg/ml em HCl contendo cálcio, a qual foi adicionado uma mistura tampão a pH 7,4 com grupo controlo na ausência de colagénio. Aos demais grupos foram adicionados os agentes mineralizantes, para analisar seu comportamento com massas variáveis. Um controlo na ausência de cálcio foi adicionado para estes grupos. Os pHs das soluções foram avaliados e as amostras tratadas para visualização em microscópio eletrónico, pela técnica SEM e análise elementar por EDS. Para a análise através de microscopia eletrónica de varrimento, todos os grupos A, B, C, na ausência de controlo negativo (colagénio) evidenciaram imagens compatíveis com padrões de mineralização, o que não se observa nos grupos de controlo negativo. Todavia, os resultados obtidos por EDS mostram uma relação Ca/P, distinta, variando entre grupos e nos grupos controlo. O presente trabalho sugere um papel ativo do colagénio na regulação da mineralização in vitro, assim como o potencial mineralizante dos agentes estudados. O MTA apresentou-se ainda como um interessante reservatório de iões cálcio.The study of bone and teeth on mammals, on a mineralization biomimetic context, is particularly interesting for its impact on current regeneration therapies and strategies of human mineralized tissues. The biologically originated crystals, mainly on dentin, are typically generated on a extracellular organic scaffold, mainly constituted by Type I collagen. Thus, the present study attempted to analyze the effect of the presence of two remineralizing agents, of clinical use, ProRoot MTATM and RecaldentTM CCP-ACP, and their in vitro mineralizing patterns on the presence of collagen by Scanning electron microscopy (SEM) and Energy Dispersive Spectroscopy (EDS). Therefore, three experimental groups were made, in triplicates, with Group A consisting on a collagen solution 2mg/ml on HCl containing calcium, in which was added a buffer solution pH 7,4, with control groups in the absence of collagen. On the remaining group, the mineralizing agents were added, to analyze its behavior on with different weights. This groups had another control group, in the absence of calcium. The pHs of the solutions were evaluated and the samples received proper treatment to be analyzed by SEM and EDS. Analyzing through SEM, all groups (A, B, C), in the absence of a negative control (collagen) presented images compatible with mineralization, which wasn’t displayed by the negative control groups. Despite that, the results obtained by EDS show a Ca/P distinct proportion among the experimental and control groups. The present work suggests an active role of collagen on regulating in vitro mineralization, as well as the mineralizing potential of the agents studied. MTA presented itself as an interesting calcium ions reservoir