Evaluación del efecto antitumoral del antígeno E7 del VPH-16 fusionado a la proteína COX-2.

Propósito y método de estudio: En este proyecto nos enfocamos en evaluar el efecto antitumoral del antígeno E7 del VPH-16 fusionado a la proteína COX-2. Las construcciones realizadas fueron COX2-E7, COX2 y COX2-E7ΔERAD; estas últimas fueron utilizadas como controles para evaluar la importancia de E7 y del casete de degradación de 19 aminoácidos de la COX-2. Una vez diseñadas y sintetizadas las construcciones, estas fueron caracterizadas por digestión enzimática a través de enzimas de restricción específicas, también se realizó una caracterización por western blot para evaluar que efectivamente fueran capaces de dirigir la expresión de las proteínas de fusión del tamaño esperado. También se llevaron a cabo ensayos de inmunofluorescencia para evaluar la localización subcelular de las proteínas de fusión y si estas inducen una respuesta de estrés en retículo endoplásmico. Por último, se realizaron ensayos de terapia génica in vivo mediante la técnica de biobalística en un modelo murino de cáncer cervicouterino. Para ello, ratones de la cepa C57BL/6 fueron inoculados con la línea celular TC1 de manera subcutánea en el costado izquierdo, tanto en ensayos profilácticos como terapéuticos utilizando como control la construcción CRT- E7, la cual posee un efecto antitumoral bien caracterizado. Conclusiones y contribuciones: En este proyecto demostramos que las construcciones que contienen la proteína COX-2 son dirigidas al retículo endoplásmico. Además, aquellas construcciones que cuentan con el antígeno E7, activan una respuesta a estrés en el retículo endoplásmico y que las construcciones que contienen el antígeno dirigido a este organelo son tan eficientes como el control CRT-E7. Esta estrategia podría ser utilizada probando otro tipo de antígenos poco inmunogénicos para evaluar su potencial para despertar respuestas específicas