Transformation of tobacco (Nicotiana tabacum L.) and culture of isolated tissues and cells for production of recombinant proteins

Tabakas – vienas svarbiausių modelinių augalų, naudojamų augalų biotechnologijoje. Šiuo metu šis augalas naudojamas rekombinantinių baltymų, antikūnų ir kitų medžiagų gamyboje, farmacijos ir pramonės srityse. Šio tyrimo tikslas buvo atlikti augalo genetinę transformaciją peptido imituojančio gyvūninį ekstraląstelinį matriksą genu bei optimizuoti kaliaus bei suspensijos auginimo sąlygas. Eksperimentai atlikti 2017–2019 metais, LAMMC sodininkystės ir daržininkystės institute, Babtuose. Atlikta tabako transformacija naudojant Agrobacterium rhizogenes ir Agrobacterium tumefaciens šeimos bakterijas. Atrinktos 5 kaliaus linijos, kuriose transgeninio peptido buvimas patvirtintas PGR. Nustatyta, kad transgeninis kalius geriausiai augo MS maitinamojoje terpėje su 0,1 mg / l kinetino + 1 mg / l NAR arba su 0,25 mg / l BAP + 2 mg / l NAR terpėse. Šiose terpėse stebimas eksponentinis kaliaus augimas - po 6 savaičių jo augimas padidėjo iki 78 kartų. Naudojant transgeninį kalių, inicijuota tabako ląstelių suspensija, kuri geriausiai augo ir ląstelės buvo gyvybingiausios maitinamojoje terpėje su 0,25 mg/l BAP ir 2 mg/l NAR priedu.Tobacco is one of the most important model plant used in plant biotechnology. Currently, this plant is used in studies of the production of useful recombinant proteins, antibodies and other substances in pharmaceutical and industrial fields.The aim of this study was to carry out an animal extracellular matrix imitating gene of the plant using genetic transformation and to optimize the conditions for the growth of transformed callus and suspension. The experiments was done in 2017-2019 at Institute of Horticulture in Babtai Lithuania. Transformation of tobacco have been done using Agrobacterium rhizogenes and Agrobacterium tumefaciens. Five callus lines were selected transgenic peptide was confirmed by PCR. It was found that transgenic callus was the best in MS nutrient medium with 0.1 mg / l kinetin + 1 mg / l NAR or 0.25 mg / l BAP + 2 mg / l NAR media. In these media, exponential growth of callus was observed - after 6 weeks its growth increased to 78 times. Using transgenic callus, a suspension of tobacco cells was initiated, which was best grown and the cells were most viable in the nutrient medium with 0.25 mg / l BAP and 2 mg / l NAR supplement.Biologijos katedraGamtos mokslų fakulteta