Diagnosi rapida di influenza aviare mediante real-time RT-PCR one step

La diffusione dei focolai di influenza aviaria A/H5N1 e gli episodi di mortalità nell’uomo registrati nei paesi del Sud-Est asiatico, hanno determinato un crescente allarme nella comunità scientifica e nell’opinione pubblica a causa del potenziale pandemico rappresentato dalla evoluzione del virus. La tempestiva identificazione del virus nelle specie aviarie domestiche e selvatiche, attraverso l’impiego di strumenti diagnostici altamente sensibili, specifici e di rapida esecuzione, è essenziale per l’adozione rapida ed efficace delle misure sanitarie di controllo. La real-time RT-PCR, basata sull’impiego di sonde fluorescenti, rappresenta lo strumento diagnostico in grado di garantire l’identificazione dei virus influenzali, sia umani che aviari, presentando notevoli vantaggi in termini di rapidità, sensibilità e specificità rispetto alle metodiche classiche di isolamento del virus e alle altre metodiche molecolari. Nell’ottica di un continuo miglioramento dell’iter diagnostico per l’identificazione del virus dell’influenza aviaria, è stato sviluppato un saggio di real-time RT-PCR, impiegando una sonda fluorescente Minor Groove Binder, che presenta una serie di innovazioni rispetto alle piattaforme per real-time sinora disponibili per la diagnostica virologica. Il sistema diagnostico è stato calibrato e ottimizzato in termini di specificità, utilizzando un panel di virus influenzali aviari, di origine suina, equina, oltre che umana, dimostrando inoltre una sensibilità tale da renderlo applicabile per lo screening di campioni biologici prelevati dalle specie aviarie domestiche e selvatiche