ANÁLISIS MOLECULAR DEL MODELO EN RATÓN DE LUPUS HUMANO

El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune multifactorial crónica, en donde se generan autoanticuerpos que causan inflamación, dolor y daño tisular. Su etiología no se conoce con certeza, en su desarrollo participan una combinación de factores genéticos, ambientales, hormonales y algunos fármacos, antibióticos e infecciones, que en conjunto superan el umbral de tolerancia inmunológica y producen la enfermedad. Nuestro grupo de investigación ha propuesto que en el LES y en otras enfermedades autoinmunes participan lípidos asociados en partículas lipídicas. Estas partículas se encuentran en las membranas celulares, en donde participan en diferentes funciones y son transitorias, pero cuando se hacen permanentes son inmunogénicas e inducen la formación de anticuerpos anti-partículas lipídicas. Esta propuesta se confirmó por el desarrollo en ratones BALB/c y NIH de una enfermedad muy parecida al LES, por la administración de los fármacos cloropromacina (CPZ), procainamida o hidralazina que inducen la formación estable de partículas lipídicas en la membrana celular, o de la administración de liposomas que llevan partículas lipídicas inducidas por estos fármacos o por el catión manganeso. Este modelo de lupus ha permitido hacer diferentes estudios para entender y seguir el curso de esta enfermedad, sin embargo, no se ha identificado su perfil genético, por lo que en este trabajo se usó la tecnología de los microarreglos para esta determinación. Se trabajaron 4 grupos con cinco ratones hembra BALB/c cada uno. Al grupo I se le administró solución salina fisiológica, al grupo II liposomas lisos sin partículas lipídicas, al grupo III y IV liposomas con partículas lipídicas inducidas con Mn2+ o con CPZ. Todos los grupos recibieron la solución o los liposomas correspondientes dos veces por vía intraesplénica y después cada semana por vía intraperitoneal durante 4 meses. Los ratones que recibieron liposomas con partículas inducidas con Mn++ o con CPZ presentaron lesiones faciales con alopecia al segundo y al tercer mes del inicio de la administración; en ambos grupos se detectaron al final del primer mes anticuerpos anti-partículas lipídicas por citofluorometría y ELISA-liposomal y anti-cardiolipina por ELISA al segundo mes pero en menor título que los anti-partículas. Los ratones de los grupos I y II no presentaron lesiones faciales, ni los anticuerpos anti-partículas o anti-cardiolipina a lo largo del estudio. El análisis molecular se hizo en los bazos, debido a que este órgano contiene una mayor cantidad de células mononucleares, que son las que han presentado una mayor variación en su expresión genética en el LES. Con el RNA de los bazos se hicieron los microarreglos Agilent de todo el genoma de ratón. Al comparar el perfil de expresión genética de los grupos I y II se encontró que no hubo variación y los genes que se sobre o sub expresaron no están relacionados con enfermedades autoinmunes. Al comparar los grupos que desarrollaron la enfermedad (III y IV) con el control (II), se encontró que algunos de los genes sobre expresados codifican para factores del complemento, presentación de antígenos exógenos, producción de anticuerpos, señalización por TLR-4 o por NOD-2; los que disminuyeron su expresión corresponden a reconocimiento por células NK y apoptosis. En los grupos III y IV los genes señalados tuvieron la misma expresión. El análisis de la expresión de los genes modificados sugiere que: 1) la señalización de TLR-4 por vía de TRIF conduce al aumento en interferón tipo 1, una de las principales características del LES, 2) la sobre expresión en interferón tipo 1, la disminución en el reconocimiento por células NK y la disminución de apoptosis conducen a un aumento en células autoreactivas que llevan a un recrudecimiento del lupus, 3) la sobre expresión de genes de presentación de antígenos y de producción de anticuerpos también favorecen el lupus, y 4) la sobre expresión en componentes del complemento apoyan la lisis celular propuesta en el modelo en estudio. Al identificar el perfil genético de este modelo y compararlo con el del LES, se contribuye a conocer la similitud entre ambas enfermedades, así como a una mejor comprensión de las bases moleculares e inmunológicos de enfermedades autoinmunes, que lleve a desarrollar mejores estrategias para su tratamiento