Efecto de la transfección estable del ADNc del inhibidor de la furina sobre la proliferación y diferenciación de la línea celular HL-60

Desde 1990 se ha demostrado que la enzima furina participa en una gran variedad de procesos fisiológicos y fisiopatológicos, a través del procesamiento de diferentes substratos en diversos compartimentos celulares. Además la furina está involucrada en la génesis y progresión del cáncer, y su sobreexpresión en algunos tipos de tumores está asociada con un fenotipo celular más agresivo (Kjatib A-M; 2001 y Bassi D; 2002) Previos resultados en el laboratorio de Bioquímica Celular del Instituto de Fisiología de la BUAP, demostraron que la línea celular HL-60 (leucemia promielocítica humana) expresba la furina con un peso molecular (PM) de 58 kDa y que la difernciación hacia neotrófilo dieminuía drásticamente los niveles de la misma, mientras que éstos no variaban durante la diferenciación inducida hacia macrófago. Con el fin de continuar con esta línea de investigación, en el presente trabajo y mediante la técnica de western-blot, se identificaron dos formas de la enzima furina con PM de 97 y 58 kDa en los macrófagos derivados de HL_60. La activación de los mismos con LPS produjo un aumento del 24.2% y 29.7%, respectivamente, de ambas moléculas: siendo la furina de 58 kDa la más abundante en estas células. Por otra parte utilizando dos variantes de la técnica de inmunocitoquímica se observó que en las células HL-60 indiferenciadas, la furina se encuentra localizada tanto de forma perinuclear y poralizada exclusivamente en el citoplasma, como en la membrana plasmática. Además se analizó la participación de la furina en la proliferación de las células HL-60, mediante su inhibición por la transfección del ADNc del inhibidor específico 1-PDX. De esta manera, mediante la técnica de incorpotación de 3H-timidina, se observó que la transfección transitoria y permanente del inhibidor produjo una disminución de la proliferación en todos los tiempos estudiados; alcanzando un pico máximo de la inhibición a las 28horas, donde la disminución fue del 59.15%. Por otro lado, mediante estudios de inmunomarcación y citometria de flujo, se demostró que la transfección permanente del inhibidor de la furina en las 4 clonas HL-60 analizadas produjo un aumento del orden de 1.9 a 4.5 veces en la expresión del marcador de diferenciación CD11b con respecto a las células HL-60. Estos resultados indican que la inhibición de la enzima furina por la presencia del inhibidor 1-PDX disminuye la capacidad proliferativa de las células HL-60; y se demuestra por primera vez, que la transfección permanente de este inhibidor es capaz de inducir la diferencación celular temprana en estas células promieloides, sin el agregado de agentes difernciantes externos