Evolución Dirigida de una Fosforribosil Antraniliato Isomerasa Consenso por medio de sus dos segmentos (ba)4

Los barriles TIM, por su abundancia entre los organismos, así como por su diversidad de funciones, son un excelente modelo para estudio y manipulación. De igual forma han despertado un creciente debate alrededor de su histora evolutiva en cuanto a un origen mono o polifilético. (Lang, et.al 2000) Dentro de estos estudios se han empleado técnicas combinadas de evolución dirigida junto con ingeniería de proteínas sitio-dirigidas para modificar las propiedades de esta conformación como la adaptación a altas y bajas temperaturas, la estereo-selectividad y la especificidad al substrato; sin embargo, han sido muchos los obstáculos a los que se han enfrentado para realizar experimentos más ambiciosos como la migración catalítica fuera de la misma familia o el intercambio de subunidades completas o loops entre diferentes barriles. Entre las barreras más importantes se encuentran las la relativamente pobre exploración del espacio de secuencia, la eficiencia de transformación y la falta de un modelo estable que permita manipulaciones mucho más agresivas. El presente proyecto evalúa por un lado, una metodología novedosa de transformación utilizando el sistema de recombinación Cre-LoxP para manipular una enzima consenso como andamiaje estable como alternativa para salvar las limitantes mencionadas. Los resultados que se obtuvieron apuntan a que la enzima además de ser estable es suficientemente flexible como para aceptar favorablemente el sitio LoxP ya que se observa una complementación de función en una cepa auxótrofa y por lo tanto, plegamiento a su estado nativo