EFECTO DE LA EXPRESIÓN ECTÓPICA Y DEL SILENCIAMIENTO DE eIF3f EN CÉLULAS DE ADENOCARCINOMA PULMONAR HUMANO (A549)

El presente trabajo consiste en alterar, a través de su silenciamiento y sobre-expresión, la función del gen eIF3f (subunidad f del factor eucarióntico de iniciación 3) y evaluar su efecto celular. El gen eIF3f forma parte del complejo multiproteico eIF3, el cual tiene una función importante en el inicio de la traducción (Benne y Hershey 1978). Originalmente se observó que la expresión transcripcional del gen eIF3f de frijol (Phaseolus vulgaris) estaba relacionada a la división celular (Llanderl-Mendoza 2003). Resultados del laboratorio mostraron que la expresión del gen eIF3f de frijol en células meristemáticas de tabaco TBY-2 está circunscrita a la transición G2/M del ciclo celular, y que es esencial para la progresión del mismo (Llanderal-Mendoza 2003). Resultados recientes sugieren que es un regulador negativo de la traducción y que tiene una función en la señalización apoptótica (Shi et al. 2006). Por lo anterior, se consideró interesante investigar si cambios en los niveles de expresión del gen eIF3f tiene un efecto sobre la proliferación de células humanas. Se investigó el efecto de la expresión ectópica y del silenciamiento del gen eIF3f sobre el crecimiento de células provenientes de un adenocarcinoma pulmonar de humano (línea celular A549), con el fin de reunir evidencia que indiquen su relevancia en la división celular y su posible uso en terapia génica contra el cáncer. Se encontró que en cultivos quiescentes, bloqueados en G0 por limitación de suero, los niveles de expresión del gen eIF3f están abatidos, en comparación con cultivos en crecimiento. Para determinar el perfil de expresión del gen eIF3f humano durante el ciclo celular, se sincronizaron células A549 en la fase S mediante la adición al cultivo de agentes inhibidores de la progresión del mismo en esta fase (afidicolina o hidroxiurea), se liberó al cultivo del agente inhibidor y se tomaron muestras a distintos tiempos y durante 24 horas para determinar el índice mitótico, así como las concentraciones del ARNm y la proteína de eIF3f. Tanto el perfil de expresión del ARNm como el de la proteína de eIF3f humano mostraron ser idénticos. Se encontró que el perfil de expresión del gen eIF3f humano es parecido al de plantas en cuanto a que oscila durante el ciclo celular; pero en plantas presenta un máximo de expresión en la transición G2/M, mientras que en humanos presenta este máximo y otro más en la fase S. Estos datos se corroboraron mediante la determinación de la actividad del promotor del gen eIF3f fusionado transcripcionalmente al gen reportero de luciferasa, en las fases G0, M y S