EXPRESIÓN Y PURIFICACIÓN DE UN FRAGMENTO CONSERVADO DE LA PROTEÍNA RIBOSOMAL S6 EN PLANTAS

La proteína TOR (blanco de rapamicina) es una cinasa altamente conservada en eucariontes, perteneciente a la familia de la fosfatidilinositol-3- cinasa (PI3K). TOR esta involucrada en la regulación del crecimiento celular a través de la fosforilación de diferentes blancos corriente abajo, en respuesta a condiciones favorables de nutrientes y/o factores de crecimiento (Martin y col., 2005; Schmeizie y col., 2000.). El mecanismo por el cual TOR regula el crecimiento celular es a través de su efecto sobre la maquinaria de traducción. En condiciones nutritivas optimas, TOR no solo promueve la producción de nuevos ribosomas, sino que también incrementa la velocidad de traducción de los ribosomas ya existentes (Schmelzle y col., 2000.) Dos de los principales blancos de la proteína TOR son: la proteína S6 cinasa (S6K) y la proteína de unión al factor del inicio de la traducción en eucariontes, el eIF4E (4EBP). S6K es una proteína de aproximadamente 70 kDa que fosforila varios sustratos, siendo el blanco mejor caracterizado la proteína ribosomal S6 de la subnidad menor del ribosoma (S6rp). Aunque no se ha demostrado la presencia de la proteína 4EBP en plantas, existen evidencias de la ruta de señalización que involucra a la TOR en organismos vegetales (Levine y col., 2006). Para hacer la caracterización de esta ruta en estos últimos organismos, es necesario contar con herramientas nuevas, como son los anticuerpos contra las proteínas, que forman parte de la ruta de señalización. Así, el objetivo del presente trabajo consiste en expresar y purificar un fragmento conservado de la proteína ribosomal S6, con la finalidad de posteriormente obtener anticuerpos policlonales contra esta proteína en plantas utilizando la técnica del DNA recombinante