Effect of in vitro embryo cultivation conditions on optimal embryos metabolism

U ovom istraživanju pokušali smo utvrditi koji uvjeti kulture in vitro (kultivacija sa 5% ili 20% O2) pogoduju razvoju optimalnih zametaka te kakav je njihov utjecaj na metabolizam zametaka. Dosadašnju metodu utvrđivanja optimalnih zametaka, odnosno njihove kvalitete (procjenu morfologije) potrebno je dopuniti objektivnom, neinvazivnom metodom koja ne podliježe subjektivnom sudu biologa, odnosno embriologa. Takva potencijalna metoda je utvrđivanje metaboličkih profila aminokiselina zametaka testiranjem potrošenog medija u kojem smo ih kultivirali. Razdvajanje i analiza aminokiselina provedeni su kromatografijom obrnutih faza na tekućinskom kromatografu visoke djelotvornosti masa spregnute s tandemskom spektrometrijom, a zametke smo kultivirali sa različitim udjelima kisika – sa 5% ili 20%. Dobiveni rezultati su nam pokazali da snižena koncentracija kisika (5%) povećava biološki potencijal optimalnih zametaka za implantaciju odnosno za ostvarivanje trudnoće. Također smo utvrdili da kultivacija zametaka sa povišenom koncentracijom kisika (20%) utječe na metabolizam zametaka lošije kvalitete kod kojih uzrokuje povećan obrtaj aminokiselina.In our research we tried to determine which in vitro culture conditions (cultivation under 5% or 20% O2) can yield optimal embryos and their effect on embryo metabolism. Current method for determining optimal embryos (morphology assessment) should be supplemented by an objective, non-invasive. method that is not subject to the subjective judgment of biologists –embryologist. Such a potential method is determination of the metabolic profile of amino acids of embryos by analysing the spent media in which they were cultivated with Reversed Phase Chromatography on Ultra High-Performance Liquid Chromatograph in combination with Liquid Chromatography – Mass Spectrometry. Embryos were cultured under different conditions – 5% or 20% O2. Results showed that by lowering oxygen concentration to 5 % we can increase biological potential of optimal embryos for implantation and pregnancy. We determined that cultivation of embryos with increased oxygen concentration (20%) affects the metabolism of lower quality embryos, which causes an increased turnover of the amino acids