KONSTRUKSI PUSTAKA EKSPRESI METAGENOMIK BAKTERI DARI SISTEM PENCERNAAN Achatina fulica DAN SELEKSI KLON REKOMBINAN DENGAN AKTIVITAS β-GLUKANASE

Beta-glukanase dapat menguraikan dinding sel dari berbagai bentuk mikroorganisme fungal seperti Candida albican dan berbagai manfaat lainnya. Achatina fulica adalah gastropoda dengan aktivitas selulolitik tinggi, terutama karena banyaknya glikosida hidrolase yang dihasilkan oleh hewan tersebut dan mikrobiota yang ada di dalamnya. Beta-glukanase merupakan salah satu aktivitas yang telah terbukti memberikan efek antibiofilm Candida albican secara invitro maupun invivo. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengkonstruksi pustaka metagenomik bakteri dari sistem pencernaan Achatina fulica dan mendapatkan klon rekombinan dengan aktivitas β-glukanase. Metode konstruksi pustaka metagenomik terdiri dari ekstraksi langsung DNA total bakteri dalam sistem pencernaan Achatina fulica yang diikuti oleh fragmentasi DNA menggunakan enzim restriksi SfiI, ligasi pada vektor λTriplEx2, perakitan fag λ rekombinan, kemudian transduksi ke sel inang (E. coli XL1-Blue), dan memilih transforman dengan mengidentifikasi adanya klon rekombinan dengan aktivitas β-glukanase dengan menggunakan substrat spesifik Laminarin. Hasil titering pustaka bakteri dari sistem pencernaan Achatina fulica untuk campuran ligasi terbaik dengan perbandingan fragmen DNA dan vektor = 1 : 2 adalah 6,75 x 108 dan ditemukan plak yang diduga merupakan klon rekombinan yang mengemban gen β-glukanase pada pustaka ekspresi metagenomik bakteri dari sistem pencernaan Achatina fulica tersebut