Distribuição intraespecífica de enzimas fosfolipase A2 e miotoxinas em peçonhas de serpentes irmãs da espécie Bothrops moojeni (Viperidae, Crotalinae)

Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)Os acidentes ofidicos quando não são fatais causam várias complicações às vítimas, resultando geralmente em seqüelas permanentes. No Brasil o gênero Bothrops é responsável pela maioria destes acidentes, sendo que a administração do soro antiofidico é a forma mais eficaz de tratamento. Este trabalho teve como objetivos fracionar um "pool" de peçonhas de Bothrops moojeni, analisar a atividade fosfolipásica (PLA2) e miotóxica das frações isoladas, e correlacionar por eletroforeses em gel de poliacrilamida (PAGE), a presença ou ausência destas toxinas em peçonhas de serpentes irmãs, nascidas e criadas sob mesmas condições no Setor de Répteis (UFU). O "pool" de peçonhas foi fracionado em CM-Sepharose Fast Flow, e eluido no tampão bicarbonato de amônio (NH4HCO3) 0,05 M p1-1 8, estabelecendo-se um gradiente convexo de concentração (0,05 a 0,5 M). Foram obtidas nove frações, designadas MIa, MIb, MIla, MIIb, MIII a MVII, respectivamente. A atividade PLA2 das amostras foi determinada por titulação potenciométrica, usando como substrato uma emulsão aquosa de gema de ovo. A atividade miotóxica foi determinada pela atividade da enzima creatina kinase, utilizando-se o kit CK NAC activated 335. As frações MIa e MV apresentaram intensa atividade fosfolipásica, sendo que em PAGE-SDS observa-se uma forte banda protéica em MV, com peso molecular de aproximadamente 14.000. Esta provavelmente corresponde à enzima PLA2 de caráter básico. Comparando o perfil eletroforético das peçonhas de irmãs que tem elevada atividade PLA2 com o da fração MV em PAGE pH 4,5, observa-se a presença de uma banda muito intensa e de mesma mobilidade eletroforética. Já as irmãs com baixa atividade PLA2, praticamente não apresentam esta banda. A atividade CK foi detectada nas frações MVI e MVII e em PAGE-SDS ambas apresentam uma banda principal de maior mobilidade eletroforética, com peso molecular em torno de 13.000. Nestas frações provavelmente estão as miotoxinas (I e 11) isoladas desta peçonha. As peçonhas das irmãs quando comparadas com frações MVI e MVII em PAGE pH 4,5, não apresentam diferenças significativas na expressão destas isoformas. Assim, a análise eletroforética comparativa nos possibilita concluir que em relação à composição em miotoxinas, as irmãs não apresentam uma variabilidade significativa, mas apresentam em relação à PLA2 básica, sugerindo diferenças na expressão gênica destas isoformas. Propomos a seleção de espécimes para produção de antisoros, com base em critérios bioquímicos e na toxicidade das amostras, já que esta variação entre as diferentes peçonhas, pode limitar a capacidade de neutralização dos antisoros produzidos. Palavras-chave: peçonhas, variabilidade, Bothrops moojeni irmãs