Evaluation of molecular technologies by using RNA for tuberculosis diagnosis

임상병리학과/석사결핵균의 검출을 위해 사용되는 세균학적 검사법은 오랜 시간이 소요되고 민감도와 특이도의 한계가 있어 최근 PCR을 이용한 핵산증폭법이 결핵검사에 많이 이용되고 있다. 그러나 현재까지 사용되고 있는 결핵검사용 핵산증폭법은 대부분 DNA를 표적으로 하고 있다. 그런데 같은 수의 세포일 경우 특정 유전자의 DNA보다 RNA가 더 많은 수로 존재한다. 따라서 RNA를 표적으로 하는 핵산증폭법의 민감도가 더 높을 수 있다. 또한 DNA 복제과정을 응용하여 개발된 PCR보다 전사된 RNA로부터 DNA를 합성하고 합성된 DNA로부터 많은 양의 RNA를 다시 전사하는 nucleic acid sequence-based amplification (NASBA)을 이용한다면 결핵검사의 민감도를 더 높일 수 있을 것이다. 이에 본 연구에서는 Mycobacterium bovis BCG에서 추출한 DNA와 RNA를 이용하여 PCR, RT-PCR, real-time RT-PCR, real-time NASBA를 수행하여 DNA 및 RNA를 표적으로 한 결핵검사법의 민감도를 비교하는 한편, PCR 및 NASBA를 이용한 결핵검사법의 민감도를 비교하였다. 그 결과, 16S rRNA 유전자를 표적으로 한 PCR의 민감도는 10 3 cfu/㎖ 및 100 pg이었고, 16S rRNA를 표적으로 한 RT-PCR의 민감도는 10 2 cfu/㎖ 및 10 pg로 나타나 DNA보다 RNA를 표적으로 한 결핵검사법이 더 민감하였다. 또한 rpoB mRNA와 16S rRNA를 각각 표적으로 하여 RT-PCR을 수행한 결과, rpoB mRNA를 표적으로 하였을 때의 민감도가 10 5 cfu/㎖인 반면 16S rRNA를 표적으로 한 RT-PCR의 민감도가 10 2 cfu/㎖로 나타나 RNA의 표적에 따라 민감도가 달라짐을 알 수 있었다. 이어 16S rRNA를 표적으로 한 RT-PCR과 형광 표지 probe를 이용한 real-time RT-PCR 및 real-time NASBA를 수행하여 핵산증폭법에 따른 민감도를 비교한 결과, real-time RT-PCR에서 10 fg과 real-time NASBA 1 fg의 민감도를 확인하였다. 따라서 RNA를 표적으로 real-time RT-PCR, real- time NASBA 등을 이용하여 결핵균을 검출할 경우 보다 민감한 결핵검사가 가능할 것으로 사료된다.ope