Isolation of the Rat Liver Parenchymal Cell and It's Biological Functions

의학과/석사[영문] [한글] 저자는 0.05% collagenase와 0.10% hyaluronidase를 함유한 CFH(calcium free Hanks) 용액 70ml를 25분간 연속 재순환 관류하여 형태 및 생물학적으로 건전한 간장실질 세포를 분리하였다. 관류장치는 Miller등(1951)이 고안한 것을 변경하여 사용하였으며, 간장 실질 세포 분 리방법은 Howard and Pesch(1968)의 방법과 Berry and Friend(1969)의 방법을 수정하여 간장 1 gm당 43×10**6 -51.9×10**6 세포를 분리하였다. 세포 수율은 Howard and Pesch 보다 8배증가, Berry and Friend의 수율치와 거의 비슷하였다. 저자가 분리한 1×10**6세 포는 수용성 단백질 1.58mg에 해당하였으며 trypan blue판정법에 의한 생세포는 95%이상 이였다. 저자의 간장 실질 세포 분리방법은 Berry and Friend의 방법보다 훨씬 간편하며 분리된 세포는 그 형태 및 생물학적으로 건전한 세포이며 그 수율도 높아 이와같이 분리된 세포 는 칼슘이온(Ca**++)과 알부틴이 함유된 Hanks용액에서 호흡(enrogenous respiration)하 였으며 산소소모량이 1시간동안 시간에 비례하여 증가하였다. 분리된 세포에 트립신을 처리하여 인위적으로 원형질막에 변형을 일으켜 이것이 세포 호흡 및 함수탄소 대사에 어떻게 영향하는가를 보기 위하여 HAnks용액에 0.25mg% 함유한 트립신을 40℃에서 5분간 처리한 후 이세포의 생물학적 기능을 대조군과 비교 관찰하였다 . 트립신 처리한 세포는 (1×10**6)대조군에 비하여 산소소모가 30%이상 증가하였다. 산 소소모량을 수용성 단백질(mg)을 기준으로 표시하여 대조군과 비교한 결과 단위 세포(1× 10**6)를 기준으로 표시할 때와 같은 수치의 증가를 관찰하였다. 이와같은 결과를 저자는 복잡한 단위세포수 표시법보다 단백질 단위 표시방법이 더 간 편하고 정확하다는 사실을 확인하였다. D-glucose (14)**C(U)를 가한 배양액에서 1시간 동안 호흡하는 동안에 생성된 (14)**CO ^^2를 정량한 결과 대조군에 비하여 트립신 처리군에서 10%이상 증가하였다. 이것은 단백 질 분해 효소에 의해 세포 표면에 이상이 초래되어 그로 인하여 세포의 해당작용과 당질 운반이 증가된 결과로 사료된다. 이와같은 사실은 악성 종양세포에서 관찰된 여러 연구자들의 실험결과와 일치하나 미토 콘드리아 내막에 존재하는 succinic dehydrogenase와 NADH dehydrogenase활성이 트립신 처리받은 세포와 대조군 사이에 차이가 없는 사실로 미루어 보아 악성 종양세포가 나타내 는 양상과는 근본적으로 다른것 같다. Iaolation of the Rat Liver Parenchymal Cell and It's Biological Functions In Kyung Lim Department of Medical Science The Graduate School Yonsei University (Directed by Prof. Yoon Soo Kim) A modified enzymatic technic with collagenase and hyaluronidase for the preparation of the isolated intact parenchymal cell from rat liver by the continous recirculating perfusian system devied by Miller et al(1951) is described. This enzymatic technic moditied from the method of Howard and Pesch(1968), an Herry and Friend(1969), can be obtained about with 43 x 10**6 -51.9 x 10**6 cells pergm of liver. This yield of Howard and Pesch, and is almost equal to that obtained by Berry & Friend. It was found that 1 x 10**6 cell is equivalent to about 1.58 mg of water soluble protein. Over 95% of viable intact cells were obtained at each preparation. The results indicate that our preparative procedure for obtauning viable intact cells is much more rapid and is a simple, high yield preparation. The cells respire in the medium of Hank's solution can be maintained for 1 hour. The biological properties of isolated intact cell were compared with those of the isolated cell trypsinized briefly with 0.25 mg% trypain solution. Oxygen uptake was incerased more than 30% over that of the contral cell per 1 x 10**6 cells. Furthermore (14)**CO^^2 production during cell respiration of medium containing D-glucess (14)**C(U) in trypsinized cell was increased more than 10% over that of the control(P>1). this suggests to us that preteolytic enzyme brings about a change in the cell that proteolytic change of the cell surface causes an increment of glycolysis and sugar transport. This in turn suggests the loss of a normal control device which regulates the rate of glucose transport as has been observeed in the malignant cell by many other investigators. However, no significant differences of specific activity of SDH and NADH dehydrogenase were observed between the control and the trypsin treated cell during respiration.restrictio