Desarrollo de un procedimiento técnico para la extracción y cuantificación de ADN microbiano de bilis

Trabajo presentado en el VII Workshop Probióticos, Prebióticos y Salud: Evidencia Científica, celebrado en Sevilla (España) el 28 y 29 de enero de 2016En los últimos años se está poniendo de manifiesto más claramente la relación entre el metabolismo de sales biliares y colesterol con la microbiota del tracto gastrointestinal, así como sus posibles implicaciones en el estado de salud y enfermedad. Mientras que la microbiota del estómago e intestino han sido caracterizadas con detalle, el microbioma de la bilis y el tracto biliar apenas han sido estudiados, fundamentalmente debido a las dificultades para acceder al material biológico y a la falta de técnicas moleculares adecuadas. De hecho, a pesar de los avances que las técnicas de secuenciación masiva han supuesto para la descripción de microbiotas de muestras humanas complejas, existen aún claras limitaciones en fluidos, como la sangre o la bilis, con una carga microbiana reducida y en los que otras biomoléculas pueden interferir en la obtención de ADN de calidad. En este trabajo se presenta la optimización de un protocolo de extracción y purificación de ADN total de bilis, así como la discriminación y cuantificación por PCR cuantitativa (qPCR) del ADN bacteriano (ADNr 16S) y eucariota (ADNr 18S), inicialmente en muestras de bilis de cerdo inoculada con concentraciones crecientes de microrganismos, y posteriormente aplicado en muestras reales humanas. El procedimiento desarrollado permite acceder a detectar ADN microbiano biliar de forma clara y precisa. Este paso es clave para poder llegar de forma eficiente y sin sesgos a la descripción del ecosistema microbiano biliar mediante técnicas moleculares avanzadas como la ultrasecuenciación.Peer reviewe