Evaluación de los niveles de expresión de lncRNAs y miRNAs en muestras de citología en base líquida y su aplicación como biomarcadores tempranos en cáncer cervicouterino.

Introducción: El cáncer cervicouterino (CaCU) es una alteración celular que se origina en el epitelio del cuello uterino y que se manifiesta inicialmente a través de lesiones intraepiteliales precursoras de lenta y progresiva evolución, el 99 % de los casos están vinculados con infecciones genitales por el virus del papiloma humano (VPH) de alto riesgo, la cual es la infección vírica de transmisión sexual más común del aparato reproductor. A nivel mundial, esta neoplasia ocupa el cuarto lugar de incidencia de cáncer en mujeres, con un número estimado de 266 000 muertes y unos 528 000 nuevos casos en 2012. Ese mismo año el CaCU representó el segundo lugar de incidencia y mortalidad por cáncer en mujeres mexicanas. La mayoría de las mujeres infectadas con VPH eliminan la infección, las mujeres que no logran eliminar el virus (que presentan infecciones persistentes) pueden desarrollar lesiones de alto y bajo grado y posteriormente cáncer. Actualmente no se cuenta con una prueba sensible y específica que permita predecir el riesgo para el desarrollo del CaCU. Diversos grupos de investigación han propuesto la implementación de la citología en base líquida (CBL) para la detección y cuantificación de posibles biomarcadores tempranos de lesiones premalignas y así detectar a las pacientes con riesgo a CaCU, en este ámbito los lncRNAs y miRNAs han mostrado resultados prometedores. Objetivo: Evaluar los niveles de expresión de lncRNA MALAT 1 y miR-34a en muestras de citología en base líquida (CBL) mediante ddPCR, analizando su posible aplicación como biomarcadores tempranos de lesiones premalignas y CaCU. Métodos: Se diseñaron y optimizaron pruebas para la detección y cuantificación de muestras VPH 16,18 y 51 positivas, empleando ddPCR (droplet digital PCR). Posteriormente se realizó la extracción de ADN y ARN de 67 muestras de CBL provenientes de la consulta de colposcopía del Hospital Universitario José Eleuterio González UANL. A partir de ARN se realizó una retrotranscripción y se evaluaron los niveles de expresión del lncRNA MALAT1 (n=67) y miR34a (n=29) mediante ddPCR. Resultados: Se diseñó y optimizó un método para detectar y cuantificar VPH 16, 18 y 51 mediante ddPCR, encontrándose en el caso del VPH 16 y 18 una correlación entre los datos obtenidos mediante ddPCR y resultados previos de PCR en tiempo real (qPCR). Se encontró una asociación entre la sobreexpresión de MALAT 1 y la positividad de VPH (p =0.008) y carga viral alta (p=0.027). No se encontró asociación con el grado de la lesión (p=0.756) ni con las muestras que presentaban coinfecciones (0.237). Por otro lado se identificó una asociación entre la subexpresión de miR-34a y la positividad de VPH (p =0.010), monoinfecciones (p=0.021), coinfecciones (p=0.030), carga viral baja (p=0.042) y alta (p=0.014), pero no se encontró asociación con el grado de la lesión (p=0.190). Conclusiones: Los niveles de expresión del lncRNA MALAT 1 y el miR-34a, están asociados con el estatus del VPH(+/-), la coinfección y la carga viral pero no con el grado de las lesiones precursoras del CaCU