Aislamiento de Rickettsia bellii a partir de garrapatas Amblyomma ovale y Amblyomma incisum procedentes del sur de Brasil

Objective. To isolate and characterize rickettsiae from the ticks Amblyomma ovale and Amblyomma incisum collected in the state of São Paulo. Materials and methods. Adult, free-living A. ovale and A. incisum were collected in an Atlantic rainforest area in the state of São Paulo, Brazil. Each tick was tested using the hemolymph assay; samples from positive ticks were placed in shell vials in order to isolate rickettsiae and subsequently grown in Vero cells. Amplification of three rickettsial genes (gltA, htrA and ompA) was attempted using polymerase chain reaction (PCR) for each isolate obtained. Amplicons were subsequently sequenced. Results. A total of 388 A. incisum and 50 A. ovale were collected. Only one A. incisum and one A. ovale were hemolymph-test positive. Rickettsiae were successfully isolated from these ticks; however establishment in Vero cell culture was successful only for the isolate from A. ovale. Bacterial contamination in the first cell passage of the A. incisum isolate precluded successful isolation of the organism. PCR products were obtained with the gltA and htrA primers for the two isolates, but no product was obtained with the ompA primers. By BLAST analysis, partial gltA and htrA sequences of isolates from A. ovale and A. incisum were similar to the corresponding sequences of R. bellii. Conclusions. This is the first report of R. bellii infecting A. incisum and the first successful isolation from A. ovale.Objetivo. Aislar Rickettsias mediante cultivo celular a partir de muestras de garrapatas Amblyomma ovale y Amblyomma incisum del estado de São Paulo Materiales y métodos. A. ovale y A. incisum adultas de vida libre fueron colectadas en una área de selva tropical Atlántica en el estado de São Paulo, Brazil. Cada garrapata fue sometida a la prueba de hemolinfa, las garrapatas positivas en esta prueba fueron evaluadas con la técnica de shell vial con el propósito de aislar rickettsias en cultivo de células Vero. Pasajes celulares de los aislados fueron identificados genotípicamente por la reacción en cadena por la polimerasa (PCR) dirigidos a fragmentos de tres genes de rickettsias (gltA, htrA y ompA), seguido por secuenciación de ADN. Resultados. Un total de 388 A. incisum y 50 A. ovale fueron colectadas. Por la prueba de hemolinfa, únicamente una A. incisum y una A. ovale fueron positivas. Las Rickettsias fueron exitosamente aisladas de estas garrapatas. Sin embargo, el cultivo continuo en células Vero fue posible sólo para la garrapata A. ovale, debido a contaminación bacteriana en el primer pasaje celular de la muestra de A. incisum. Los productos de PCR fueron obtenidos con los primers gltA y htrA para los dos aislados, no obstante, ningún producto fue obtenido con los primers ompA. Por análisis BLAST, secuencias parciales de gltA y htrA procedentes de los aislados de A. ovale y A. incisum fueron similares a las secuencias correspondientes a R. bellii. Conclusiones. Este es el primer reporte de R. bellii infectando A. incisum y el primer establecimiento exitoso de un aislado de A. ovale