Simultaneous detection of CTV, CEVd and HSVd using Arizona 861 S1 Citron and RT-PCR

R. Camps, M. Castro, and X. Besoain. 2014. Simultaneous detection of CTV, CEVd and HSVd using Arizona 861 S1 Citron and RT-PCR. Cien. Inv. Agr. 41(2): 255-261. Citrus tristeza virus (CTV), Citrus exocortis viroid (CEVd) and Hop stunt viroid (HSVd) are pathogens that affect citrus trees in Chile. The simultaneous use of a rapid diagnostic method with the effective cleaning of infected budwood is a powerful preventative method for controlling viral diseases. The objective of this study was the multiple detection of CTV, CEVd, and HSVd, through bio-amplification in Arizona 861-S1 citron plants, combined with two incubation temperatures and multiple RT-PCR in two steps. Citron indicator plants were inoculated with the three pathogens, both individually and simultaneously, with four un-inoculated plants as controls. After four months of incubation at the two different temperatures, both the multiple and individually inoculated plants showed symptoms associated with these pathogens, which were subsequently corroborated through the use of multiple RT-PCR in two steps. This diagnostic method could be employed as an efficient, cost-effective alternative to the methods that are currently in use for detecting CTV, CEVd and HSVd, nevertheless its effectiveness should also be evaluated with tests using different isolates of these pathogens.R. Camps, M. Castro y X. Besoain. 2014. Detección simultanea de CTV, CEVd y HSVd a través de Cidro Arizona 861-S1 y RT-PCR. Cien. Inv. Agr. 41(2):255-261. El virus de tristeza de los cítricos (CTV), el viroide de la exocortis (CEVd) y el viroide Hop Stunt viroid (HSVd), son patógenos que afectan a plantas de cítricos en Chile. El uso de un método de diagnóstico rápido junto con la limpieza eficaz de portainjertos infectados, es una potente herramienta preventiva en el control de las enfermedades virales. El objetivo de este estudio fue detectar de forma múltiple CTV, CEVd y HSVd con el método de bio-amplificación en Cidro Arizona 861-S1, combinado con dos temperaturas de incubación y RT-PCR, en dos pasos. Se inocularon plantas de Cidro Arizona 861-S de forma individual y simultánea con los tres patógenos. Luego de cuatro meses de incubación a dos diferentes temperaturas, las plantas inoculadas de forma individual y de forma múltiple mostraron síntomas asociados con estos patógenos que posteriormente fueron corroborados mediante RT-PCR múltiple en dos pasos. Este método resulta eficaz y rentable al ser una detección simultánea, y podría ser utilizado de forma alternativa a los que están actualmente en uso para la detección de CTV, CEVd y HSVd, sin embargo, su eficacia también debe ser evaluada usando diferentes aislados de estos patógenos