Comparação de quatro pares de primers na utilização da técnica de PCR para detecção de DNA de M. leprae em biópsias de lesão de pele de pacientes com hanseníase

Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)Hanseníase é uma doença crônica causada pelo Mycobacterium leprae, um parasita intracelular obrigatório de células do sistema mononuclear. Suas formas clínicas são definidas levando-se em conta padrões imunológicos, formando um amplo espectro intimamente proporcional à potencialidade de resposta do hospedeiro ao parasita. A mucosa nasal é a principal porta de saída de bacilos de pacientes com hanseníase multibacilar não tratados, daí a importância de termos um diagnóstico de certeza, para que todos os casos da doença possam ser diagnosticados e tratados adequadamente conforme sua classificação operacional, evitando assim, as deformidades físicas causadas pelos danos neurais (que ocorrem nos casos mais graves da doença). No presente estudo foram analisados quatro pares de primers, que ampliam fragmentos de 372, 130, 89 e 78pb, para detectar a presença de DNA de Mycobacterium leprae em amostras de biópsias de pele de 88 pacientes com diagnóstico de hanseníase; foi usado um grupo controle de 35 pacientes do CREDESH, negativos para esta doença. O fragmento amplificado de 78 pb, com 52.3%. Os fragmentos amplificados de 372pb e 89pb detectaram 43.2% e 42.1% respectivamente, enquanto que o IB de pelefoi positivo em 40.9%, concordando com os valores encontrados na literatura, que permanecem entre 36 e 41%. O primer que amplifica fragmentos de 130 pb detectou 34.6% dos pacientes negativos para 372pb; 38.4% dos negativos para 89pb e 21.1% dos negativos para o 78pb e deixou de detectar 13.8%, 11.1% e 13.8% dos casos positivos para estes mesmos pares de primers. A PCR com primer que amplifica fragmentos de 130pb concordou com 86.1% com o IB de pele, e detectou 42,3% dos pacientes negativos para este teste. A positividade encontrada neste estudo com os pares de primers que amplificam os fragmentos de 130pb e 78pb concordaram com a literatura, que relata valores entre 50,0% e 80,0%. A não-detecção pelos demais pares de primers que amplificam 372,89 e 78pb pode ter ocorrido por limitações na PCR, e por isso novos estudos devem ser feitos, principalmente testando outras técnicas como Nested-PCR, PCR em tempo real e RT-PCR. Obteve-se que a maior positividade dos testes é obtida quando associamos os testes moleculares com o primer de 130pb ao teste baciloscópico, mantendo boa especificidade e acurácia, e aumentando assim, a sensibilidade do teste, e por isso, preconizamos o uso da associação destes dois testes como diagnóstico de certeza de hanseníase