Purificação e Caracterização de Antígenos de taquizoídos de Toxoplasma gondii Ligantes de Concanavalina A (Con-A) através de Immunobloting

Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)O toxoplasma gondii é um parasita protozoário causados ad toxoplasmose, infecção que pode se desenvolver com diferentes formas clínicas. T. gondii se apresenta de formas diferentes dependendo de seu estágio de evolução. A forma taquizoíta se manifesta na fase aguda da infecção e tem um papel importante no diagnóstico da doença. Vários antígenos de T. gondii têm sido propostos para utilização no diagnóstico da toxoplasmose. O método sorológico é o mais utilizado para a detecção da doença. Esses métodos sorológicos confirmam estágios específicos em pacientes infectados, segundo os antígenos detectados. Dentre as metodologias utilizadas para o isolamento e caracterização desses antígenos, as lectinas se tornam ferramentas importantes para a detecção de antígenos glicosilados, que podem ser altamente imunogênicos. Neste estudo, utilizou-se a cromatografia de afinidade para isolar frações antigênicas de taquizoítos de Toxoplasma gondii com afinidade para Concanavalina A. Estas frações antigênicas foram denominadas EatTg-ConA (extrato Antigênico de taquizoítos de Toxoplasma gondii ligantes de Concanavalina A). A análise eletroforética desse extrato antigênico (EatTg-ConA) em SDS-PAGE apresentou frações moleculares de massa molecular aparente de 22 kDa e 64 kDa. Verificamos através de Western blotting que tais frações foram reativas com soros de pacientes infectados em diferentes fases da doença. As frações moleculares de massa aparente de 22 kDa foram visíveis no extrato de taquizoítos de Toxoplasma gondii, bem como no EatTg-ConA. Houve forte reação com a IgG de fase crônica do EatTg-ConA, assim como um IgG de fase crônica e aguda do estrato bruto da preparação antigênica do parasito. As bandas de 64 kDa foram visíveis no extrato de taquizoítos de T. gondii e no EatTg-ConA apenas na fase crônica da doença. Os EatTg-ConA de alto peso molecullar 177 e 159 kDa apresentaram maior frequência de reatividade frente a todos os soros IgG de fase aguda e crônica e IgM, se repetindo em 100% dos soros. Na preparação antigênica EatTg-ConA do presente estudo, quando analisamos a eletroforese em SDS-PAGE e coloração pela prata, observamos uma fraca coloração do material nessa porção do gel. No nosso estudo contribuímos para o desenvolvimento de novas técnicas para separação e caracterização parcial de antígenos de taquizoítos de T. gondii ligantes de ConA e verificamos se tais frações antigênicas reagiram com soros de pacientes infectados em diferentes fases de infecção da toxoplasmose