Avaliação da expressão de BTK e Ki-67 em doenças linfoproliferativas crônicas de linhagem B por citometria de fluxo

Base teórica: doenças linfoproliferativas crônicas de linhagem B (DLPC-B) são neoplasias clonais que afetam linfócitos B maduros. A tirosina quinase de Bruton (do inglês Bruton’s tyrosine kinase, BTK) é uma proteína essencial para o desenvolvimento, diferenciação e sinalização nos linfócitos B. Ki-67 é uma proteína nuclear associada à proliferação celular. A avaliação de proteínas envolvidas nas vias de sinalização oncogênicas pode levar ao aprimoramento do diagnóstico, tratamento e definição de prognóstico das DLPC-B. Objetivo: avaliar a expressão de BTK e Ki-67 em linfócitos de portadores de DLPC-B. Métodos: para avaliação de BTK foi realizado um estudo transversal; foi avaliada a expressão de BTK em amostras de pacientes saudáveis e de pacientes com diagnóstico de DLPC-B. Para avaliação de Ki-67 foi realizado um estudo transversal. As amostras foram marcadas com CD45 FITC e CD19 APC para identificação dos linfócitos B. Após a lise das hemácias, foi realizada marcação citoplasmática de BTK PE e/ou Ki-67 PerCP-Cy5.5. O percentual de expressão e a intensidade de fluorescência média (IFM) dos marcadores avaliados foram determinados nos linfócitos B. A análise estatística foi realizada com testes de correlação de Pearson e Spearman entre BTK ou Ki-67 e as demais variáveis clínicas e laboratoriais, e ANOVA seguido por teste post hoc de Bonferroni para comparações entre grupos. Foi considerado resultado significante quando P < 0,05. Resultados: não foram observadas diferenças na expressão de BTK e não houve associação entre a expressão de BTK e as variáveis clínicas avaliadas. A expressão de Ki-67 foi maior nos grupos linfoma do manto, linfoma de Burkitt e linfoma difuso de grandes células B em relação aos demais; após análise multivariada, a IFM de Ki-67 foi associada à IFM de CD38. Conclusão: no presente trabalho, a expressão de BTK em DLPC-B foi similar a de linfócitos B normais e a expressão de Ki-67 foi maior nas DLPC-B com curso clínico mais agressivo.Background: mature B-cell neoplasms (MBCN) are clonal neoplasms that affect mature Bcell lymphocytes. Bruton’s tyrosine kinase (BTK) is an essential protein for the development, differentiation and signaling in B-cell lymphocytes. Ki-67 is a nuclear protein associated to cellular proliferation. Evaluation of proteins involved in oncogenic signaling pathways can lead to improvement in the diagnosis, treatment and prognosis definition in MBCN. Objective: to evaluate the expression of BTK and Ki-67 in lymphocytes of MBCN patients using flow cytometry. Methods: a cross-sectional study was conducted for BTK assessment; BTK expression was assessed on healthy patients samples and MBCN samples. For evaluation of Ki-67 a crosssectional study was conducted. Samples were stained with CD45 FITC and CD19 APC for identification of B-cell lymphocytes. After lysis of red blood cells, cytoplasmic staining of BTK PE and/or Ki-67 PerCP-Cy5.5 was performed. Percentage of expression and mean fluorescence intensity (MFI) of the markers were determined in B-cell lymphocytes. Statistical analysis was performed with Pearson and Spearman correlation tests between BTK and Ki-67 and the other clinical and laboratory variables, and ANOVA followed by post-hoc Bonferroni test for comparisons between groups. Results were considered significant when P < 0.05. Results: no differences in BTK expression were identified and there was no association between BTK expression and clinical variables evaluated. Ki-67 expression was higher in mantle cell lymphoma, Burkitt lymphoma and diffuse large B-cell lymphoma cases; after multivariate analysis, MFI of Ki-67 was associated with MFI of CD38. Conclusions: in this study, BTK expression in B-cell neoplasms was similar to that of normal B-cell lymphocytes and Ki-67 expression was higher in MBCN with more aggressive clinical courses