Effect of low level laser therapy in fibroblasts exposed to different concentrations of hydrogen peroxide

Esse estudo in vitro teve como objetivos comparar o processo citotóxico dos fibroblastos expostos ao gel clareador Peróxido de Hidrogênio nas concentrações de 25% (DMC) e 35% (DMC e Dentsply), além de testar se o efeito antiinflamatório e de reparação celular do laser diodo em baixa intensidade é capaz de reverter o processo citotóxico dos fibroblastos expostos aos géis clareadores em diferentes protocolos de aplicação. As células foram plaqueadas em 56 poços (2x106 células por poço) e colocadas em contato com meio de cultura condicionado com cada um dos géis clareadores durante 40 minutos, simulando o tempo do clareamento em consultório. Células que cresceram em meio de cultura não condicionado representam o controle positivo e células que receberam os meios condicionados, mas não foram irradiadas, compõe os 3 controles negativos. As células que estiveram em contato com meio condicionado com os 3 tipos de gel clareador, foram irradiadas pelo laser de baixa intensidade infra vermelho próximo (780 nm, 10 J/cm2) em 1 aplicação (0h) ou em 3 aplicações (0, 3 e 6h). A viabilidade celular foi medida 24h após a irradiação, através da atividade mitocondrial celular mensurada pelo ensaio de citotoxicidade MTT. Os resultados mostraram não haver diferença de citotoxicidade entre os três diferentes géis testados. Os grupos que receberam irradiação em única aplicação não mostraram diferença na viabilidade celular em relação aos controles negativos. Dentre os grupos que foram irradiados 3 vezes, apenas o grupo LP25 II mostrou um acréscimo estatisticamente significativo da viabilidade celular em relação ao controle negativo correspondente, mas ainda distante do valor do grupo controle positivo. Portanto, o laser de baixa intensidade, em 1 ou 3 aplicações, mostrou não ser capaz de reverter o processo citotóxico causado pelos géis clareadores testados nesse trabalho.This in vitro study aimed to compare the cytotoxic process of fibroblasts exposed to Hydrogen Peroxide bleaching gel in concentrations of 25% (DMC) and 35% (DMC and Dentsply). In addition the anti-inflammatory and cell repair effects of a low-intensity diode laser was able to reverse the cytotoxic process of fibroblasts exposed to bleaching gels in different application protocols. Cells were plated in 56 well plates (2x106 cells per well) and placed in contact with culture medium conditioned with each of bleaching gels for 40 minutes to simulate the time of in-office bleaching. Cells grown in fresh culture medium represented a positive control, and cells that received conditioned medium but were not irradiated composed the negative controls. Cells that were in contact with conditioned medium with the 3 types of whitening gel were irradiated by low-intensity laser near infrared (780 nm, 10 J/cm2) in 1 application (0h) or 3 applications (0, 3 and 6h). Cell viability was measured 24h after irradiation by cellular mitochondrial activity measured by the MTT cytotoxicity assay. The results showed no difference in cytotoxicity among three different gels tested. Among the groups that were irradiated 3 times, only the LP25 II group showed a statistically significant increase in cell viability compared to the corresponding negative control, but still far from the value of the positive control group. Therefore, the low intensity laser, in one or three applications, proved to be unable to reverse the cytotoxic process caused by bleaching gels tested in this research