Clonagem e caracterização do receptor de estrogénios da dourada (Sparus aurata)

The steroid hormone estrogen is known to have important actions in vertebrates influencing growth, differentiation and functioning of several systems. In fish has been recognised that estradiol-176 (E2) exert a role in feminisation of the gonads, induction and maintenance of vitellogenesis in the liver and in the feedback mechanisms in the pituitary. The estrogen effects are mediated in cells by binding to a specific nuclear protein, the estrogen receptor (ER). In turn, the ER acts as a transcription factor binding to DNA specific sequences and regulating the transcription of estrogen target genes. As an initial step to further understand the roles of estrogen in seabream, Sparus aurata, a protandrous hermaphrodite developing a testis during their first year of life and undergoing sex reversal to female between the second and the third years, this thesis aimed to clone and characterise the seabream ER (sbER). Within these proposed research goals was achieved the cloning of two distinct forms of sbERs and its sequences were analysed and compared to the ER available sequences in other vertebrate species. The expression of ERs in seabream adult tissues and early life stages was characterised. A potential distinct function for each ER in seabream was also investigated by analysing its expression in response to E2- stimulation and during induced sex reversal.Os estrogénios, são hormonas esteroides com importantes funções nos vertebrados, influenciando o crescimento, diferenciação e funcionamento de vários sistemas. Nos peixes, tem sido demonstrado que o estradiol-178 (Ez) exerce um papel na feminização das gónadas, na indução e manutenção da vitelogénese no fígado e também nos mecanismos de retroacção na pituitária. Os efeitos dos estrogênios são mediados pela ligação a uma proteina nuclear especifica, o receptor de estrogênios (ER). Por sua vez, o ER actua como factor de transcrição ligando-se em regiões especificas do DNA, regulando a transcrição dos genes alvo. Como um aspecto fundamental para a melhor compreensão das funções dos estrogénios na dourada, Sparus aurata, uma espécie hermafrodita protândrica desenvolvendo testículos durante o primeiro ano de vida e sofrendo uma inversão sexual para fêmea entre o segundo e terceiro ano, foi estabelecido como objectivo principal da presente tese a clonagem e caracterização do receptor de estrogênios da dourada (sbER). De acordo com os objectivos delineados foram clonadas duas formas distintas de receptor, cujas sequências foram analisadas e comparadas com as existentes noutras espécies de vertebrados. A expressão dos ERs nos diferentes tecidos de animais adultos, bem como nos estados iniciais do desenvolvimento embrionário e Ian/ar foi caracterizada. investigou-se ainda a existência de uma possível função para cada ER na dourada através da análise da sua expressão em resposta á estimulação com Ez e durante o processo de inversão sexual induzida.Programa PRAXIS XXI BD/9214/96 - Fundação para a Ciência e a TecnologiaNATO's, Scientific Affairs Division in the framework of the Science for Stability Programme