Analyse von Signalwegen in formalinfixierten Brustkrebsgeweben.

Hintergrund: Das Ziel dieser Studie ist es, Methoden zur relativen und absoluten Proteinquantifizierung in formalinfixierten und paraffineingebetteten (FFPE-) Brustkrebsgewebeproben zu entwickeln und zu optimieren, mit besonderem Schwerpunkt auf HER2-vermittelte Signaltransduktion. Material und Methoden: Mit Hilfe einer kürzlich entwickelten Methode zur Extraktion vollständiger Proteine aus FFPE-Gewebeproben testeten wir die Spezifität von mehr als 50 kommerziell erhältlichen Antikörpern im Western-blot und Protein-Mikroarray. Aufgereinigte HER-Rezeptor-Proteine wurden verwendet, um absolute Proteinkonzentrationen in FFPE-Gewebeextrakten zu bestimmen. Ergebnisse: 23 kommerziell erhältliche phosphospezifische und nichtphosphospezifische Antikörper zeigten eine hohe Spezifität. Eine präzise Messung der HER2-Konzentration war möglich, indem die Signale bekannter Mengen an aufgereinigtem HER-Protein mit denen von HER-positiven Gewebeproben verglichen wurden. Schlussfolgerung: Unsere Ergebnisse dienen als Grundlage für die Entwicklung von diagnostischen Methoden für die quantitative Analyse von deregulierten HER-Rezeptoren und nachgeschalteter Signalwegsproteine in FFPE-Gewebeproben