Next-generation Sequencing in der Diagnostik der genetischen Schwerhörigkeit

Hintergrund: Die phänotypische und genetische Heterogenität nicht-syndromaler Schwerhörigkeit haben die genetische Diagnostik betroffener Patienten bisher erschwert. Neue Methoden der Hochdurchsatzsequenzierung (next generation sequencing, NGS) erlauben es jedoch alle für Schwerhörigkeit bekannten Gene parallel und umfassend zu untersuchen. Dies kann entweder mittels eines krankheitsbezogenen Panels für Schwerhörigkeit (Paneldiagnostik) oder der Sequenzierung des gesamten Exoms ("whole exome sequencing") erfolgen.Material und Methoden: Bei 80 Patienten mit hochgradiger Schwerhörigkeit oder Gehörlosigkeit erfolgte mit Hilfe eines "costom design" Agilent Anreicherungskit die Anreicherung und Seqenzierung auf ein Panel von 93 bekannten Schwerhörigkeitsgenen. Die Hochdurchsatzsequenzierung erfolgte auf dem SOLiD 5500xl System. Gefundene Varianten wurden anschließend mittels Sanger Sequenzierung validiert, um das Ergebnis durch eine unabhängige, etablierte Methode zu sichern. Darüber hinaus erfolgte in Indexpatienten mittels Agilent In Solution Anreicherung eine "Whole Exome" Sequenzierung. Auch hier wurden Varianten mit Sanger Sequenzierung validiert.Ergebnisse: Auf Basis der "Panel-Sequenzierung" konnten einzelne Basenaustausche und Deletionen in bekannten Genen für genetische Schwerhörigkeit identifiziert und anschließend durch Sanger-Sequenzierung bestätigt werden. Die "whole exome" Sequenzierung steht in ungeklärten Fällen mit negativem Ergebnis als weitere Methode zur Verfügung. Hier können neue, Schwerhörigkeit verursachende Gene identifiziert werden.Diskussion: Die simultane Hochdurchsatzsequenzierung in Form eines "Hörpanels" für alle bekannten Schwerhörigkeitsgene erlaubt eine umfassende genetische Diagnostik. Der Einsatz exomweiter Sequenzierung ermöglicht darüber hinaus auch die Detektionen von Mutationen in bisher nicht bekannten Genen für Schwerhörigkeit