Frequência dos haplótipos das hemoglobinas nas doenças falciformes no Estado do Paraná e evolução clínica

Orientadora: Profª. Drª. Mara Albonei Dudeque PianovskiCoorientador: Prof. Dr. Ricardo Lehtonen Rodrigues de SouzaTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e do Adolescente. Defesa: Curitiba, 01/12/2015Inclui referências : f.139-153Área de concentração: Hemato-oncologia pediatrica, farmaceuticaResumo: Introdução: Dentre as hemoglobinopatias, as doenças falciformes são as mais frequentes na população mundial. A anemia falciforme, a S-talassemia ? e a doença da HbSC apresentam gravidade clínica variável, sendo um dos prováveis motivos a presença de polimorfismos na HbS, identificados pelas enzimas de restrição que originarão os haplótipos nominados conforme a origem geográfica CAR, BEN, SENEGAL, CAMARÕES e ARABE-INDIANO. Objetivos: identificar os haplótipos das doenças falciformes; suas frequências e distribuição histórico-geográficas no Estado do Paraná, e associação com os eventos clínicos. Material e método: Trata-se de estudo transversal, descritivo, qualitativo, quantitativo e analítico para a definição dos haplótipos, sua frequência e distribuição geográfica; associativo na avaliação da interferência dos haplótipos sobre o quadro clínico; observacional e analítico quanto à evolução clínica. As amostras de sangue dos pacientes foram coletadas em papel filtro com técnica utilizada na triagem neonatal, nos ambulatórios de Hematopediatria do HC-UFPR, do Hemepar e das crianças detectadas pelo Programa de Triagem Neonatal no Paraná (SRTN-FEPE-PR). A genotipagem foi realizada no laboratório do CEGEMPAC. A população de pacientes com doença falciforme foi constituída por 100 SS, 45 S?, 49 SC. Para a determinação dos haplótipos da globina ?S, foram amplificadas as regiões do grupamento do gene ?S (5'?G, ?G, ?A, ??, 3'??, 5'?) e os polimorfismos, identificados com as enzimas de restrição XmnI, HindIII, HincII e HinfI. Para os haplótipos da ?C globina e talassemia ?, além das enzimas acima, utilizou-se Hinc II para a região ? e AvaII e BamHI, para as regiões ? e 3'?. Os protocolos de trabalho para a HbS foram baseados em Sutton, Bouhassira e Nagel (1989), Lapouméroulie et al. (1992); os haplótipos da talassemia ? foram baseados em Orkin et al. (1982) e os da HbC segundo Boehm et al. (1985). Os haplótipos indeterminados foram considerados "atípicos". Quanto à gravidade clínica, foram analisados os resultados de exames clínico-laboratoriais de 122 pacientes sendo 52 SS, 42 SC e 28 S? talassemia, na faixa etária de 0 a 15 anos. Resultados: No Paraná, de 100 pacientes SS genotipados, 76,0% foram CAR; 17,5%-BEN; 0,5%-SEN; 0,5%-Camarões e 5,5%-atípicos. Não foi encontrado o haplótipo Árabe-Indiano. Em relação aos 45 pacientes S?, foram encontrados: 24,4% com o genótipo CAR/?I, 22,2%- CAR/?II; 4,4%-CAR/?VI, BEN/?atp e Satp/?I; 6,6%-CAR/?IX; 26,6%-CAR/?atp; 2,2%- BEN/?I, BEN/?II e BEN/?IX. Não foram encontrados os haplótipos talassêmicos IV, V, VII e VIII. Em relação à doença da HbSC, em 49 pacientes genotipados: 48,9% foram CAR/CI; 8,1%-CAR/CII; 2,0%-CAR/CIII; BEN/CII e Satp/CI; 30,6-BEN/CI e 6,1%-CAR/Catp. Os haplótipos da HbC foram: 81,6%, CI; 10,2%, CII; 2,1%, CIII e 6,1%, Catp. Conclusão: Possivelmente pela miscigenação característica da população brasileira, a gravidade das doenças falciformes não se associou aos haplótipos ou à concentração de HbF; outros polimorfismos na região do grupamento da globina ? podem estar interferindo no desenvolvimento da doença. Os registros históricos mostram que os africanos trazidos ao Paraná nos séculos XVIII e XIX são do grupo étnico dos bantos, da região da Republica Centro Africana. No Paraná, a maior concentração dos africanos ocorreu na região de Antonina e Castro, apesar do baixo número de escravos em relação aos outros estados do Brasil. A Stal ? e doença SC estão mais presentes nas regiões norte do estado e na Capital. A predominância do haplótipo CAR no Paraná está em concordância com os eventos históricos. Tanto os haplótipos da talassemia ? quanto os da HbC estão associados em maior frequência ao haplótipo CAR da HbS, o que sugere miscigenação entre a HbS, a HbC e a talassemia ?. Palavras-chave: Haplótipos. Doença SC, S-talassemia ?. Evolução clínica. Estado do Paraná.Abstract: Introduction: Among hemoglobinopathies, sickle cell diseases are the most frequent occurrences in the population of the world. Sickle cell anemia, S? talassemia and HbSC disease present variable clinical severity, being one of the probable causes of the presence of polymorphism in the sickle cell hemoglobin, identified through enzymes of restriction which will originate the nominated haplotypes according to the geographic origin CAR, BENIN, SENEGAL, CAMARÕES and ARABE-INDIANO. Objectives: to identify the haplotypes of the sickle cell disease; their frequencies; historical-geographical distributions in the State of Paraná, andtheirs association with clinical events. Material and Method: It is a cross-sectional study, descriptive, qualitative, quantitative and analitical to the haplotypes determination their frequencies and geographical distribution, associative to the evaluation of the haplotypes interference over clinical development; observative and analytical to the clinical evolution. Blood samples were collected in the filter paper according to technique used in the newborn screening program, from patients in the ambulatory of Hematopediatrician of the HC-UFPR and of Hemepar and of the children detected by SRTN-FEPE-CEPE. Genotyping was performed at the laboratory of CEGEMPAC. The population of sickle cell patients was consisted by 100 SS, 45 S? and 49 SC. For determination of the haplotypes of the gene of ?S, ?C and ? talassemia, regions of the cluster of the ? gene were amplified (5'?G ?G, ?A, ??, 3'??, 5'?) using the enzyme of restriction XmnI, Hind III, HincII and HinfI. For determination of haplotypes of the ?C globin and S? thalassemia, besides the over mentioned enzymes, it was used Hinc II for the region ?, AvaII and BamHI for the regions ? and 3'?. Protocols of study for the HbS were based on Sutton et al. l989, Lapouméroulie et al. (1992); haplotypes of S? thalassemia were based on Orkin et al, (1982) and ones of the HbC in accordance to Boehm et al. (1985). The haplotypes "indeterminated" were considered 'atypical'. In relation to the clinical severity, laboratory results and clinical date of 122 patients were analyzed. Among them, 52 were SS, 42 SC and 28 S? thalassemia, between 0 to 15 years of age. Results: In Paraná, from 100 patients SS genotyped: 76,0% was CAR, 17,5% was BEN, 0,5% were SEN and CAMEROON and 5,5% were atypical. The haplotype Arabia-Indian was not found in this sample. In relation to the 45 patients S? thalassemia, 24.4% were CAR/?I, 22.2% were CAR/?II, 4.4% were CAR/?VI, BEN/?atp and Satp/?I; 6.6% CAR/?IX; 26.6% CAR/?atp; 2.2% were BEN/?I; BEN/?II and BEN/?IX. The thalassemics haplotypes IV, V, VII and VIII were not found. As to HbSC disease of the 49 patients genotypes 65.3% presented the haplotype CAR, 32.6% ?EN and 2.1% Satypical. The haplotypes of HbC were 81.6% CI, 10.2% CII; 2.1% CIII and 6.1% Catp. Through the characteristic miscegenation of the Brazilian population, the severity of the sickle cell disease were not associated exclusively with the haplotypes or the concentration of HbF; other polymorphisms in the cluster of ? globin could be interfering in the development of the disease. Historical registers demonstrate that Africans who had been brought to Paraná in the XVIII and XIX centuries were of the ethnic group Bantu,from the region of the Republic of Central Africa. In spite of the low number of slaves in relation to other states of Brazil, there were great concentration of them in the regions of Antonina and Castro. The predominance of the haplotype CAR in Paraná is in accordance with the historical events. The haplotypes of ? thalassemia as much as of HbC are more associated with haplotypes CAR of HbS,which suggests inner miscigenation between the HbS, HbC and the ? thalassemia. Keywords: Haplotypes. Sickle cell disease. Clinical evolution. State of Paraná. Brazil