Determinação qualitativa e quantitativa de metabólitos secundários de Malva sylvestris em extratos e especialidades farmacêuticas

Orientador: Prof. Dr. Roberto PontaroloCo-orientadora: Profª. Drª. Francinete Ramos CamposDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 23/05/2012Inclui bibliografiaÁrea de concentração: Insumos, medicamentos e correlatosResumoResumo: Malva é o nome polular de Malva sylvestris, planta medicinal utilizada para tratamento de afecções bucais devido a ação antiinflamatória. A fitoterapia atualmente no Brasil vem ganhando força com a implementação da Politica Nacional de Plantas medicinais e Fitoterápicos, de modo que muitas espécies presentes na RENISUS podem ser encontradas nas Unidades de Saúde, entre elas a M. sylvestris. Considerando a nova legislação de registro para medicamentos fitoterápicos, faz-se necessário aprofundar o conhecimento sobre as plantas com utilização terapêutica, bem como definir o metabólito responsável e a quantidade encontrada na espécie, para assegurar a qualidade do fitoterápico. Tendo estas informações definiu-se como objetivo do trabalho desenvolver e validar um método quantitativo para metabólitos da espécie Malva sylvestris por CLAE-DAD, mesmo porque na monografia apresentada pela Farmacopéia Brasileira 4 edição, não consta nenhum método quantitativo para eles. Dentre os metabólitos já relatados na espécie destacam-se os da classe dos flavonóides, cumarinas, compostos fenólicos e antocianidinas. Os metabólitos quantificados foram: ácido cafeico, escopoletina e ácido ferúlico. O método cromatográfico foi definido e validado com coluna C18 XBridge (4,6 x 150 mm; 5 ?m), pré coluna C18 XBridge (4,6 x 20 mm; 5 ?m), temperatura 25?C, sistema de fase móvel: Canal A água + ácido fórmico 10% v/v, canal B metanol + ácido fórmico 10% v/v e canal D acetonitrila, fluxo 0,8 mL/minuto e volume de injeção de 5?L. As amostras de extratos secos (M50, M70, M80, M90, M100, S70 e T70) foram pesadas e diluídas em metanol/água 9:1 v/v na concentração de 20 mg/mL de extrato e filtrados em 0,45 ?m, enquanto que as amostras comerciais de extratos glicólicos (EC1, EC2, EC3, EC4, EC5, EC6, EC7 e EC8) foram somente filtradas em 0,45 ?m. O extrato S70 foi o que apresentou maior concentração de ácido cafeico (17,46 ?g/mg), escopoletina (8,09 ?g/mg) e ácido ferúlico (15,32 ?g/mg). O extrato M50 entre os extratos de maceração foi o que apresentou a maior concentração de escopoletina (4,52 ?g/mg). Entre os extratos comerciais que apresentaram maior concentração dos metabólitos foram EC6 e EC7. As analises comparativas dos extratos realizada através das técnicas de CCD, RMN de 1H, CLAE-DAD e CLAE-EM associada a PCA demonstraram que as variações de proporções de etanol e água utilizadas na maceração influenciou na extração de compostos polares, que foi maior nas proporções com maior quantidade de água, enquanto modo de extração avaliados, turbólise seguido de maceração e por fim soxhlet são melhores métodos para compostos polares. O método desenvolvido mostrou-se eficiente para a caracterização e quantificação de três dos metabólitos da M. sylvestris e este pode ser aplicado em análises de controle de qualidade dos extratos comercializados contribuindo para a qualidade dos produtos manipulados e industrializados que contem extrato de malva na sua composição.Abstract: Malva is the popular name of Malva sylvestris, herb medicinal used for treatment of oral disease, due to anti-inflammatory action. The growth of phytotherapy in Brazil is due to the implementation of government program called Politica Nacional de Plantas Medicinais e Fitoterápicos. Many species of plants that are available to the population are present in list RENISUS, between them, M. sylvestris. Considering the new legislation of register for herbal medicines in Brazil, becomes necessary to deepen the knowledge about plants with therapeutic use, define this responsible metabolite and the amount found in the species to ensure the quality of the herbal medicine. Therefore, was defined as objective of the work to development and validation of analytical quantitative method for metabolites of M. sylvestris species by HPLC-DAD. Moreover, there is no reported assay method for malva metabolites in Brazilian pharmacopoeia 4th edition monograph. Between the metabolites reported in this species are flavonoid, phenolic compound, coumarins and antocyanidin. The quantified metabolites had been: caffeic acid, scopoletin and ferulic acid. The chromatographic method was defined and validated with column C18 XBridge (4,6 x 150 mm; 5 ?m), column guard C18 XBridge (4,6 x 20 mm; 5 ?m), temperature 25?C, system of mobile phase: A - 10% (v/v) formic acid solution, B - methanol/formic acid (90:10, v/v) and D - acetonitrila, at a flow rate 0,8 mL/min gradient elution mode, the detection wavelength was set as 348 nm and the injection volume of 5?L. The dry extract samples (M50, M70, M80, M90, M100, S70 and T70) had been weighed and diluted in (9:1, v/v) methanol/water solution the concentration of 20 mg/mL and filtered in 0,45 ?m, and the glycolic extract samples (EC1, EC2, EC3, EC4, EC5, EC6, EC7 and EC8) only had been filtered in 0,45 ?m. The S70 extract was what presented greater concentration of caffeic acid (17.46 ?g/mg), scopoletin (8.09 ?g/mg) and ferulic acid (15.32 ?g/mg). The M50 extract presented high er concentration of scopoletin (4.52 ?g/mg). Between the commercial extracts, EC6 and EC7 presented greater concentration of the metabolites. Comparative analysis of the extracts was carried through by TLC, RMN of 1H, HPLC-DAD and HPLC-EM associated the PCA. The results had demonstrated that variations of ethanol/water ratio in the maceration affect polar compounds extraction. Higher amounts of water extracted more compounds. Comparing the different methods of extraction turbo extraction was better method followed by maceration and soxhlet. The method developed has provided a efficient for the characterization and quantification of three M. sylvestris's metabolites. Furthermore, quality control analysis of commercial extracts can apply this method as routine, contributing to quality of medicines products that will countains of malva extract in its composition