Esteatose hepática alcoólica : correlações com receptor nuclear FXR e estresse oxidativo

Orientadora : Profa. Dra. Alexandra AccoDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 14/12/2012Bibliografia: fls. 57-36Resumo: Objetivos: Esteatose hepática refere-se ao acúmulo de triglicerídeos nos hepatócitos, e pode ser atribuida ao consumo excessivo de etanol. O fígado é o maior orgão de biotransformação do etanol e por isso pode sofrer com o estresse oxidativo gerado pelo etanol. Uma vez que a ativação do receptor FXR governa a homeostase lipídica, o objetivo desse trabalho é avaliar a participação do estresse oxidativo nas lesões hepáticas induzidas pelo etanol e testar os efeitos desse agonísta contra o desenvolvimento da esteatose hepática. Metodologia: Camundongos machos adultos (8-10 semanas) foram separados em 2 grupos (n=24) que receberam dieta líquida contendo etanol 10% (grupo controle) ou água, bem como ração hipoprotéica (6%) ou normoprotéica (23%), durante 6 semanas. Nas duas ultimas semanas de dieta, os camundongos foram novamente divididos em 8 grupos (n=6) para o início do tratamento. Desses grupos, 4 receberam o agonísta FXR 6ECDCA (3 mg.kg-1) e 4 receberam tween 1% (veículo), por via oral (gavagem). Ao final do tratamento, os animais foram anestesiados para colheita de amostras (sangue e fígado), com o objetivo de avaliar: bioquímica plasmática (AST, ALT, colesterol e triglicerídeos), estresse oxidativo hepático (catalase, superóxido dismutase, glutationa-S-transferase, glutationa reduzida e peroxidação lipídica), histologia hepática (colorações de Hematoxilina-Eosina, Sudam Black e Azul do Nilo) e expressão gênica de Srebp1f, FAS, PPARƒ¿, CYP7a1, HMGCoA reductase, ApoB, Scd1, p53 and Bax. Resultados: O etanol associado a ração hipoprotéica induziu estresse oxidativo hepático, aumentou os níveis plasmáticos de ALT e AST e induziu acúmulo de lipídeos no fígado. A ativação do receptor FXR pelo agonísta 6ECDCA teve efeitos diretos: diminuição da expressão relativa de SREBP1f diminuição dos níveis plasmáticos de triglicerídeos e colesterol, bem como efeitos indiretos, dependentes do consumo de etanol, como diminuição dos níveis plasmáticos de AST e ALT, aumento da atividade da catalase e da superóxido dismutase, bem como diminuição da taxa de lipoperoxidação e da expressão relativa da FAS. Além disso, observou-se diminuição significativa da esteatose hepática. Conclusão: Avaliando o papel do estresse oxidativo e do receptor FXR na patogênese da doenca hepática alcoólica em camundongos demonstrou-se que o 6ECDCA reverte o acúmulo de lipídeos no fígado e diminui parametros envolvidos no desencadeamento do estresse oxidativo. Assim, especulamos uma possível ação terapeutica desse agonísta na doença hepática alcoólica, prevenindo a progressão dessa doença a estágios mais severos, como fibrose, cirrose e hepatocarcinoma.Abstract: Background: Hepatic steatosis refers to the accumulation of triglycerides in hepatocytes, and it can be attributed to excessive ethanol consumption. The liver is the main organ of ethanol biotransformation and therefore, it can suffer with oxidative stress generated by the ethanol. Since the activation of the FXR receptor regulates adipose cell function, the aim of this work is to evaluate the participation of oxidative stress in ethanol-induced liver lesions and test the effects of FXR agonist against alcoholic liver steatosis development. Experimental approach: Swiss male mice (8-10 weeks) were separated in 2 groups (n=24) which received liquid diet containing 10% ethanol or water (control group) for 6 weeks, as well as a low-protein diet (6%) or norm-protein diet (23%). In the last 15 days of the diet, mice that received ethanol or water were separated again for oral treatment, performing 8 groups (n=6) in the total. From these groups, 2 received FXR agonist 6ECDCA (3 mg.kg-1) and 2 received 1% tween (vehicle), through oral treatment (gavage). Following this treatment, animals were anesthetized for sample collections (hepatic tissues and blood), in order to perform: plasma biochemistry assays (AST, ALT, cholesterol and triglycerides), hepatic oxidative stress (catalase, superoxide dismutase, glutathione-S-transferase, reduced glutathione and lipid peroxidation), liver histology (Hematoxylin-Eosin, Sudam Black and Nile Blue staining) and gene expression of Srebp1f, FAS, PPARá, CYP7a1, HMGCoA reductase, ApoB, Scd1, p53 and Bax. Results: Ethanol associated with low-protein diet induced hepatic oxidative stress, increased plasmatic ALT and AST, and induced hepatic lipid accumulation. The FXR activation by the agonist 6ECDCA had direct effects: decreased relative expression of SREBP1f and decreased the plasma levels of triglycerides and cholesterol; as well as it had indirect effects, dependent on ethanol consumption, such as reduced plasma levels of AST and ALT, increased on activity of catalase and superoxide dismutase and decreased rate of lipid peroxidation and the relative expression of FAS. Furthermore, we observed a significant decrease in hepatic steatosis. Conclusion: Evaluating the role of oxidative stress and FXR in the pathogenesis of alcoholic fatty liver disease in mice it was demonstrated that 6ECDCA reverses the accumulation of lipids in the liver and decreases the oxidative stress in mice. Thus, we speculate a possible therapeutic action of FXR agonists in alcoholic liver disease, aiming to prevent the progression of this disease to more severe stages such as fibrosis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma