Potencial antibacteriano do extrato hidrossolúvel de própolis obtido por hidrólise alcalina para a inibição de cultivos de Staphylococcus aureus e higienização de pré e pós-imersão de tetos de vacas leiteiras

Orientadora : Profa. Maria Lucia MassonTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduaçao em Tecnologia de Alimentos. Defesa: Curitiba, 27/07/2010Bibliografia: fls. 76-85Resumo: O mercado consumidor da maioria dos países está muito preocupado com resíduos de medicamentos utilizados para o tratamento de mastite. Dessa forma, o objetivo da presente tese de doutoramento é investigar o potencial antibacteriano de um extrato hidrossolúvel de própolis obtido por hidrólise alcalina sobre as cepas de Staphylococcus aureus, bem como determinar a redução da contagem de mesófilos da superfície dos tetos da glândula mamária. As amostras de leite foram coletadas de 12 vacas em lactação da raça Jersey, localizados nas dependências do CPRA, região metropolitana de Curitiba, Estado do Paraná, no período de janeiro a dezembro de 2009. A amostra de própolis foi adquirida de um apiário do município de União da Vitória, Estado do Paraná. Foram utilizadas cepas padrão de S.aureus ATCC 25923 e 88 cepas de S.aureus isolados de amostras de leite das vacas experimentais. As análises em cromatógrafo gasoso com espectrometria de massas (CG-EM) foram realizadas no Laboratório de Bioquímica do Departamento de Agroindústria, Alimentos e Nutrição da ESALQ - USP. As amostras de swabs foram colhidas de todos os quartos mamários sob condições assépticas com prévia limpeza externa dos tetos, utilizando solução de iodo glicerinado na concentração de 0,5% no grupo 01, contendo 6 animais, e extrato hidrossolúvel de própolis obtido por hidrólise alcalina (EHPHA) no grupo 02, também contendo 6 animais, totalizando 523 amostras. Nos 443 isolamentos realizados, 87,1% (386 isolamentos) eram bactérias Gram positivas, 11,9% (53 isolamentos) eram bactérias Gram negativas e 1% (4 isolamentos) eram leveduras. Os microrganismos isolados com maior freqüência foram Staphylococcus spp. (33,2%), S.aureus (19,86%) e Streptococcus agalactiae (13,7%). O EHPHA apresentou um CIM de 155,46 mg/mL e grande ação inibitória sobre as cepas de S.aureus, com halos de inibição com média e desvio padrão de 16 + 0,44 mm. Na comparação dos cromatogramas referentes ao EHEP e EHPHA, observa-se que o processo de extração por hidrólise alcalina sobre o SEMR propiciou uma purificação e conseqüente concentração dos seguintes componentes no EHPHA: Ácido benzóico, Ácido benzenopropanóico, Deoxiinositol, derivado do ácido fosfônico, derivado do ácido cetoadipico, derivado do ácido levulínico, Ácido propanóico, Ácido palmítico, Ácido hidrocinâmico. Houve a identificação de componentes comuns tanto para EHEP como EHPHA, são eles: ácido cumárico, ácido pimárico, ácido oléico, derivados silanizados de 2-metil enzofenona, derivados de vanil etileno glicol. Desse modo, a provável ação antibacteriana do EHPHA frente às cepas de S.aureus testadas, esta associada não à presença de flavonóides e sim, a presença de ácidos graxos e compostos aromáticos. Ambos os tratamentos apresentaram redução do Log UFC/cm2, a redução do Log UFC/cm2 da pré-imersão dos tetos e Log UFC/cm2 para pósimersão dos tetos em função do efeito de tratamento 1 (iodo glicerinado 0,5%) foi de 31,3% (3,54 Log UFC/cm2 para 2,43 Log UFC/cm2 ) e para o tratamento 2 (EHPHA) foi de 30,1% (3,61 Log UFC/cm2 para 2,52 Log UFC/cm2 ). O tratamento do SEMR com hidrólise alcalina para obtenção do EHPHA permitiu que fossem possíveis as extrações de compostos hidrossolúveis. A busca pela produção alternativa de alimentos livres de químicos e agroquímicos coloca o EHPHA como uma alternativa para o manejo de pré e pós-imersão dos tetos de bovinos leiteiros.Abstract: The consumer market in most countries is very concerned about residues of drugs used to treat mastitis. Thus, the aim of this doctoral thesis is to investigate the antibacterial potential of propolis aqueous extract obtained by alkaline hydrolysis on Staphylococcus aureus strains and to determine the reduction in the surface count of mesophilic bacteria the mammary gland teats. Milk samples were collected from 12 dairy cows of Jersey breed, located on the CPRA (metropolitan region of Curitiba, Parana State) in January to December 2009. The propolis sample was derived from an apiary on Uniao da Vitoria city, Parana State. Standard S.aureus ATCC 25923 strains and 88 S.aureus strains isolated from milk of experimental cows were used. Analyses by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) were performed at the Laboratory of Biochemistry, Department of Agribusiness, Food and Nutrition, ESALQ-USP. These were collected from all mammary quarters under aseptic conditions prior to external cleaning of the teats, using an iodine glycerin at 0.5% in group 1, containing six animals, and propolis aqueous extract by alkaline hydrolysis (PAEAH) in group 02, also containing six animals, totaling 523 samples. In the 443 isolations, 87.1% (386 isolates) were Gram-positive bacteria, 11.9% (53 isolates) were Gram negative and 1% (4 isolates) was yeasts. The microorganisms most frequently isolated were Staphylococcus spp. (33.2%), S.aureus (19.86%) and streptococcus agalactiae (13.7%). The high inhibitory action on PAEAH presented an MIC of 155.46 mg / mL. S.aureus strains with inhibition zones with mean and standard deviation of 16 + 0.44 mm. Comparing the chromatograms for the EHEP and PAEAH, it is observed that the process of extraction by alkaline hydrolysis on the SEMRA provided a purification and consequent concentration the following components in PAEAH: benzoic acid, benzenopropanóico, deoxiinositol, phosphonic acid derivative, derivative acid ketoadipic and levulinic acid derivative, propanoic acid, palmitic acid, and hydroxycinnamic acid. There was the identification of common components for both EHEP as PAEAH, they are: coumaric acid, pimar acid, oleic acid, silane derivatives of 2-methyl benzophenone, derivatives of ethylene glycol Vanil. However, the presence of fatty acids esters and aromatic compounds are frequent. Thus, the probable action of antibacterial PAEAH front of S.aureus strains tested, is associated not with the presence of flavonoids, but the presence of fatty acids and aromatic compounds. Both treatments showed a reduction of log CFU/cm2, reducing the Log CFU/cm2 pre-immersion of the teats and Log CFU/cm2 for post-immersion ceilings depending on the effect of treatment 1 (iodine glycerin 0.5%) was 31.3% (3.54 to 2.43 log CFU/cm2 Log CFU/cm2) and treatment 2 (PAEAH) was 30.1% (3.61 log to 2.52 log CFU CFU/cm2 / cm2). The treatment of Semra with alkaline hydrolysis to obtain the possible PAEAH has allowed the extraction of water soluble compounds. The search for alternative production of food free chemicals and agrochemicals, puts PAEAH as an alternative the management of pre-and post-immersion of the teats in dairy cattle