Ácido graxo a-linolênico e seus metabólitos, ácidos eicosapentaenóico (EPA) e docosahexaenóico (DHA), em células do tumor de Walker 256. Há equivalência nas suas ações?

Orientador : Prof. Dr. Luiz Claudio FernandesDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa: Curitiba, 28/09/2012Bibliografia: fls. 61-66Resumo: Alterações no padrão da alimentação caracterizadas pelo aumento do consumo de gorduras saturadas e trans e ácidos graxos poliinsaturados (AGPI) n-6 em detrimento à redução do consumo de AGPI n-3 estão relacionadas ao aumento na incidência de doenças crônicas degenerativas, como o câncer. O consumo de AGPI n-3 é associado a benefícios contra esta doença por promover efeitos antitumorais, antiproliferativos e imunomoduladores. Estudos in vivo demonstraram que tanto o parental ácido ?-linolênico (ALA) quanto seus metabólitos ácidos eicosapentaenóico e docosahexaenóico (EPA e DHA), são capazes de promover os benefícios relatados contra esta doença. Neste caso, o ALA sofre metabolização e é convertido em EPA e DHA não sendo possível distinguir se os efeitos são decorrentes do ácido graxo precursor ou de seus metabólitos. Assim, para elucidar essa questão, a realização de experimentos in vitro é ideal na abordagem deste tema. Este estudo investigou a proliferação e morte celular in vitro de células ascíticas obtidas do tumor de Walker 256 na presença do complexado de óleo de peixe à BSA, rico em EPA e DHA, e do complexado oro inka à BSA, rico em ALA, e do soro de animais. As células tumorais foram cultivadas em meio de cultura RPMI-1640 (Meio), na presença do veículo, albumina sérica bovina 2% (BSA), do óleo de peixe complexado à BSA (OP-BSA), do oro inka complexado à BSA (OI-BSA) ou do soro de animais controle (Soro C), portadores de tumor (Soro Ctw) e suplementados com óleo de peixe (Soro OP) e oro inka (Soro OI). A proliferação celular foi analisada pela incorporação de [2-14C]-timidina em DNA; apoptose por citometria de fluxo; expressão de proteína Bcl-2, envolvida na sinalização de morte, por western blotting. A presença do OI-BSA não reduziu a proliferação das células tumorais, com exceção para diluição 1:5, com singela redução; enquanto nos grupos OP-BSA vs. Meio, BSA e OI-BSA houve significativa redução da proliferação. As células cultivadas na presença de soro de animais suplementados com óleo de peixe e oro inka não sofreram alteração na proliferação celular quando comparadas à Meio, BSA e Soro C, e somente a presença do Soro Ctw foi capaz de aumentar a proliferação destas células, comparada à dos demais grupos. As células cultivadas na presença de OI-BSA vs. Meio e BSA não apresentaram modificações na apoptose, e esta sofreu incremento significativo nos grupos OP-BSA vs. Meio, BSA e OI-BSA. A expressão de Bcl-2 foi reduzida para OP-BSA vs. Meio, BSA e OI-BSA, mas a presença de OI-BSA não foi capaz de modificar a expressão desta proteína. O complexado oro inka não foi capaz de produzir os efeitos anti-proliferativo e pró-apoptótico in vitro em células, do tumor de Walker 256, e estes efeitos foram observados no complexado OP-BSA.Abstract: Changes in the diet such as increased consumption of saturated and trans fatty acid and n-6 polyunsaturated fatty acid (PUFA) along with reduction of n-3 PUFA have been associated with high incidence of chronic disease, such as cancer. Consumption of n-3 PUFA have been associated with benefits against such disease due to antitumoral, antiproliferative and imunomodulation effects. Studies, in vivo, showed that both n-3 PUFA, the precursor, ?-linolenic fatty acid (ALA), and their metabolites, eicosapentaenoic and docosahexaenoic fatty acids (EPA and DHA), are capable of to provoke these effects. In this case, ALA is metabolized and converted into EPA and DHA. Thus it is hard to distinguish whether the effects are due to the fatty acid precursor or its metabolites. In vitro experiments are a good approach to answer this issue. This study aimed to investigate in vitro cell proliferation and cell death in Walker 256 tumor ascitic cells in the presence of fish oil-BSA complex, rich in EPA and DHA, or oro ink-BSA complex, rich in ALA, and animal's serum. Tumor cells were seeded in RPMI-1640 culture medium (Medium), in the presence of bovine seric albumin 2% (BSA), fish oil-BSA complex (FO-BSA), oro inka-BSA complex (OI-BSA) or serum from control animals (Serum C), tumor-bearing animals (Serum Ct), animals supplemented with fish oil (Serum FO) or oro inka oil (Serum OI). The following assays were performed: cell proliferation by [2-14C]-thymidine incorporation into DNA, apoptosis by flow cytometry and expression of cell death-associated Bcl-2 protein by western blotting. The presence of OI-BSA did not reduce cell proliferation, with exception of 1:5 dilution, which lead to a small reduction in the proliferation. In OP-BSA group vs. Medium, BSA and OI-BSA there was a significant reduction in cell proliferation. Furthermore cell proliferation from tumor cells in the presence of serum obtained from rats supplemented with fish oil or oro inka did not change when compared to Medium, BSA and Serum C. On the other hand Serum from Ct was able to increase cell proliferation when compared to the other groups. Apoptosis did not change by presence of OI-BSA vs. Medium and BSA but was markedly increased by the OP-BSA group (p<0.0r vs. Medium, BSA and OI-BSA). In the OP-BSA group there was a reduction of Bcl-2 expression (p