Micropropagação de Acacia mearnsii De Wild

Orientador : Prof. Dr. Antonio Rioyei HigaCo-orientadores : Profª. Drª. Marguerite Quoirin e Prof. Dr. Antonio Natal GonçalvesDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Florestal. Defesa: Curitiba, 27/02/2014Inclui referências : f. 23-26-50-52-75-78Área de concentração : SilviculturaResumo: Acacia mearnsii De Wild. (acácia negra) é natural da Austrália,e sua madeira é utilizada para energia, carvão, cavaco para celulose e painéis. Da casca é retirado tanino, utilizado por diversos setores industriais. A clonagem de genótipos superiores é um dos métodos de melhoramento que pode ser aplicado para a espécie, mas a estaquia é limitada pelo baixo enraizamento de alguns clones. Este estudo teve como objetivo aprimorar o protocolo de micropropagação da espécie, como alternativa para clonagem massal. Dois tipos de material vegetal foram utilizados: segmentos nodais provenientes do jardim clonal e plântulas provenientes da germinação de sementes in vitro.Antes da introdução in vitro, os segmentos nodais com uma a duas gemas axilares, foram desinfestados combinando diferentes produtos (álcool etílico 70%, hipoclorito de sódio, ácido clorídrico, cloreto de mercúrio, PPM®),concentrações e tempos de imersão. As avaliações da desinfestação foram feitas aos 7, 15 e 30 dias.O meio de cultura utilizado em todas as etapas foi o MS com ¾ dos sais e dosagem completa de vitaminas, compostos orgânicos e 30g. L-1 de sacarose, com ou sem adição de carvão ativado. Após 45 dias, segmentos nodais, contendo uma gema axilar, foram subcultivados em meio MS ¾ , com adição de reguladores vegetais.Foram testados BAP (0; 2,2; 4,4; 8,8?M), TDZ (0; 0,2; 0,4; 0,8 ?M), cinetina (0; 2,2; 4,4; 8,8?M), GA3 (0; 2,2; 4,4; 8,8?M) e combinações de BAP(2,2; 11; 22 ?M) com GA3 (2 ?M).Avaliações foram realizadas aos 30 e 60 dias. Os explantes derivados do experimento com BAP foram transferidos para novo meio de cultura, com carvão ativado e sem regulador vegetal para alongamento dos brotos. Após dois subcultivos, este material foi levado para aclimatização. As mudas micropropagadas, separadas em duas classes de tamanho (2 a 4,9 cm e 5 a 8 cm),foram acondicionadas em casa de enraizamento por 40 dias. Após este período, foram transferidas para casa de sombra por uma semana e depois para área de rustificação do viveiro. As avaliações de sobrevivência e crescimento foram realizadas aos 90, 120 e 150 dias. Os dados foram analisados usando o programa IBM SPSS Statistics 19®.O melhor tratamento de desinfestação foi a combinação de álcool etílico 70%, hipoclorito de sódio a 3%, cloreto de mercúrio a 0,4%, com 80% de sobrevivência, aos 15 dias de introdução in vitro, não houve desenvolvimento de novas gemas e, aos 30 dias, não havia sobreviventes. Para plantas oriundas de sementes germinadas in vitro, a maior taxa de multiplicação (média de 7,95 gemas/ segmento nodal) foi obtida no subcultivo em meio de cultura com carvão ativado sem reguladores vegetais.O carvão ativado promoveu alongamento dos explantes. Na aclimatização, mais de 90% das mudas micropropagadas sobreviveram, independente do tamanho inicial e, aos 150 dias,as alturas médias não diferiam estatisticamente. Palavras-chave: Desinfestação. Regulador vegetal.Acácia negra.Abstract: Acacia mearnsii De Wild.(black wattle) is native of Australia, and its wood is used for energy, coal, and pulp and panels industries. The tannin extracted from the bark is used by various industrial sectors. The use of clonal forest, as a productivity improvement technique for the species, is limited by low rooting percentage of some selected clones. This study aimed to enhance micropropagation protocol of the species as an alternative for mass cloning. Two types of plant material were used: nodal segments collected from the clonal garden and seedlings originated from seed germinated in vitro. Prior to the introduction in vitro nodal segments with two axillary buds, collected from clonal garden, were desinfected using solutions combining several products (70% ethyl alcohol, sodium hypochlorite, hydrochloric acid, mercuric chloride, PPM®), with different concentrations and dipping times. Evaluations were carried out after 7, 15 and 30 days. The culture medium used in all stages was MS (Murashige and Skoog, 1962) with three quarters of salts, full strength vitamins and organic compounds, 30 g.L-1 sucrose, with or without addition of activated carbon. After 45 days, nodal segments containing an axillary bud were transferred to fresh medium with addition of plant growth regulators. BAP (0, 2.2, 4.4, 8.8 ?M), TDZ (0, 0.2, 0.4, 0.8 ?M), kinetin (0, 2.2, 4.4, 8.8 ?M), GA3 (0, 2.2, 4.4, 8.8 ?M), and combinations of BAP (2.2, 11, 22 ?M) with GA3 (2 ?M) were tested. Evaluations were performed after 30 and 60 days. Explants derived from the treatments with BAP were transferred to a new culture with activated charcoal and without growth regulators for elongation of shoots. After two subcultures, this material was acclimatized. For this, the plantlets were separated into two classes of sizes (2-4.9 cm and 5-8 cm) and placed in a greenhouse for 40 days. After this period, the plantlet were transferred a shade house for a week and then to the full sun area. Survival and height growth were evaluated at 90, 120 and 150 days. Data were analyzed using IBM SPSS Statistics 19 ® program. The best disinfestation treatment was a combination of 70% ethanol, sodium hypochlorite 3%, mercuric chloride at 0.4 %, with 80% survival at 15 days after introduced in vitro, but there was no development of new buds. For seedlings germinated in vitro, the best multiplication rate (5.89 buds/nodal segment) was obtained in the culture medium added with 8.8 ?M BAP. Activated charcoal promoted elongation of the explants. Regardless the size, more than 90% of seedlings survived after the acclimatization, and their heights did not differ statistically at 150 days of age. Keywords: Disinfestations. Plant growth regulators.Black wattle