Envolvimento das cininas no processo de cicatrização da pele

Orientadora : Profª. Drª. Daniela de Almeida CabriniCoorientadora : Prof. Dr. Michel Fleith OtukiDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 12/03/2015Inclui referências : f. 62-69Resumo: Com o objetivo de verificar o envolvimento do sistema das cininas no processo de cicatrização cutânea, animais nocaute para os receptores cininérgicos (KOB1, KOB2 e KOB1B2) e wildtype (WT/controle) foram submetidos ao modelo de cicatrização por excisão cutânea. Observou-se que no décimo dia após a excisão, os animais WT apresentaram oclusão da ferida igual a 96,13 ± 0,55%, enquanto os grupos nocaute KOB1, KOB2 e KOB1B2 apresentaram contração da lesão de 91,39 ± 0,93%, 86,80 ± 1,93% e 82,0 ± 1,73%, respectivamente. Uma vez que foram observadas diferenças com relação ao tempo de resolução do processo de reparo tecidual, foi realizada a avaliação do período de oclusão total das feridas nestes grupos. Os animais WT apresentaram fechamento completo de suas lesões no 12° dia após a realização da excisão, já os animais nocautes tiveram suas lesões elucidadas no 17° (KOB1), 21° (KOB2) e 23° dia (KOB1B2). Análises realizadas com amostras coletadas durante as diferentes fases do processo de cicatrização (fase inflamatória - 2°, 3° dias, fase proliferativa - 7 °, e fase de remodelamento tecidual - 10 ° dia), reforçaram a ocorrência de diferenças no processo de reparação tecidual nos grupos nocaute. Os resultados mostraram que houve redução significativa do número de células infiltradas no tecido lesionado durante a fase inflamatória nos grupos nocaute, sendo esta redução de 30,65 ± 3,66% (KOB1), 48,20 ± 2,52% (KOB2) e 47,72 ± 2,29% (KOB1B2), no 2° dia após a excisão. Esta redução permaneceu no 3° dia, sendo iguais a 44,26 ± 7,79% (KOB1), 67,19 ± 2,88% (KOB2) e 60,03 ± 4,28% (KOB1B2), quando comparados ao grupo WT. Na fase proliferativa (7° dia), observaram-se reduções significativas na taxa de reepitelização nos grupos nocautes para o receptor B2, em comparação ao grupo WT (76,16 ± 8,03%), sendo estas reduções iguais a 24,94 ± 8,45% (KOB2) e 23,63 ± 5,41% (KOB1B2). Análises de amostras referentes à fase de remodelamento tecidual (10° dia) mostraram diferenças nos níveis de colágeno tecidual nos animais nocautes para os receptores das cininas, sendo estas reduções iguais a 18,13 ± 2,7% (KOB1), 12,11 ± 1,52% (KOB2) e 16,96 ± 0,51% (KOB1B2), em comparação com o grupo controle (88,9 ± 2,62 ?g/tecido). Através de análises imunohistoquímicas, foram constatadas reduções significativas na taxa de proliferação de fibroblastos nos grupos nocautes B2, com reduções de 39,01 ± 5,96% (KOB2) e 38,03 ± 4,32% (KOB1B2). Assim como, foram observadas reduções no número de miofibroblastos nestes grupos, sendo estas reduções iguais a 34,87 ± 3,31% (KOB2) e 44,10 ± 3,54% (KOB1B2), em comparado ao grupo controle (32,5 ± 4,92 células/campo). No entanto, os dados dos animais KOB1 foram semelhantes aos dos WT. Os resultados obtidos sugerem a participação do sistema das cininas em processos que compõem a reparação tecidual, auxiliando na compreensão desse processo fisiopatológico e tornando as cininas uma nova opção terapêutica. Observou-se a participação direta do receptor B2 em processos de proliferação e diferenciação de células que compõem a pele. Palavras-chave: Cininas, Cicatrização, Pele, receptores cininérgicos, Receptor B1, Receptor B2.Abstract: To verify the involvement of kinins in the skin healing process, knockout animals for kinin receptors (KOB1, KOB2 and KOB1B2), and wildtype (WT / control) were subjected to excision wound healing model. It was observed that on the tenth day after excision, WT animals had occlusion of the wound equal to 96.13 ± 0.55%, while knockout groups KOB1, KOB2 and KOB1B2 presented wound closure of 91.39 ± 0.93 % 86.80 ± 1.93% and 82.0 ± 1.73%, respectively. Since differences with time resolution of tissue repair process were observed, the evaluation of the period of total occlusion of wounds in these groups was performed. Thus, the WT animals showed a complete closure of injuries on the 12th day after excision, and the knockout animals had their injuries elucidated on the 17th (KOB1), 21th (KOB2) and 23th day (KOB1B2). Analyzes performed on samples collected during the different phases of wound healing (inflammatory phase - days 2 and 3, proliferative phase - day 7, and tissue remodeling phase - day 10), reinforced the occurrence of differences in the repair process tissue in the knockout groups. Results in the knockout groups also show reduction of infiltrated cells in the tissue during the inflammatory phase, with a decline of 30.65 ± 3.66% (KOB1), 48.20% ± 2.52 (KOB2) and 47.72 ± 2.29% (KOB1B2), on the day 2 after excision. This reduction remained on day 3 being equal to 44.26 ± 7.79% (KOB1), 67.19 ± 2.88% (KOB2) and 60.03 ± 4.28% (KOB1B2), both compared to WT group. In the proliferative phase (day 7), there was a significant reduction in re-epithelialization rate in knockouts groups for the B2 receptor in comparison to WT (76.16 ± 8.03%), presenting rate reductions of 24.94 ± 8.45% (KOB2) and 23.63 ± 5.41% (KOB1B2). Analysis of samples relating to the phase of tissue remodeling (day 10) showed differences in the levels of collagen tissue, with reduced levels in knockout animals of 18.13 ± 2.7% (KOB1), 12.11 ± 1.52% (KOB2) and 16.96 ± 0.51% (KOB1B2), compared with the control group (88.9 ± 2.62 g /tissue). In knockouts B2 groups, immunohistochemical analyzes show significant reductions in fibroblast proliferation rate of 39.01 ± 5.96% (KOB2) and 38.03 ± 4.32% (KOB1B2). Again, decreases were observed in the number of myofibroblasts in these groups, equal to 34.87 ± 3.31% (KOB2) and 44.10 ± 3.54 % (KOB1B2), in comparison with the control group (32.5 ± 4.92 cells/field). Data from KOB1 animals did not show differences concerning fibroblast proliferation and myofibroblasts. The results suggest the involvement of the kinin system in processes that make up the tissue repair, assisting in the understanding of pathophysiological process, and making kinins a new therapeutic option. Highlighting the B2 receptor direct participation in proliferation and differentiation of fibroblasts in the skin. Keywords: Kinins, Wound Healing, Skin, kinin B1 receptors, kinin B2 receptors