Avaliação do extrato hidroalcoólico da casca dos cladódios da palma forrageira (Opuntia ficus- indica) em testes in vitro e interação farmacológica contra nematodas gastrintestinais de ovinos

Orientador: Prof. Dr. Marcelo Beltrão MolentoCoorientadora: Prof. Dra. Juliana B. B. MaurerDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa : Curitiba, 15/05/2017Inclui referênciasÁrea de concentração: Saúde únicaResumo: A produção de ovinos é crescente nas diferentes regiões do país e, na atualidade, este crescimento está aliado à busca por produtos de qualidade e com segurança alimentar. Para que se obtenham bons índices de produção na ovinocultura, é indispensável assegurar a saúde dos animais, principalmente, no que se refere à parasitose. Nesse contexto, a demanda por produtos livres de resíduos químicos e o intenso surgimento de parasitas gastrintestinais com resistência aos medicamentos antiparasitários convencionais, em decorrência do seu uso indiscriminado, fez surgir ointeresse em buscar novas alternativas de controle parasitário. Dentre as diversasalternativas existentes, se destaca a fitoterapia, que utiliza as vantagens dos componentes bioativos das plantas para uso farmacológico. Entre as várias plantas estudadas está a O. ficus-indica, conhecida como palma forrageira. A O. ficus-indica possui diversos compostos bioativos tais quais os compostos fenólicos que apresentam atividade anti-inflamatória, antioxidante e potencialmente atividade anti- helmíntica. Contudo, os estudos que avaliam a composição e capacidade desta planta quanto ao seu efeito em nematódeos gastrintestinais de ovinos são escassos. Dessa forma, este estudo teve por objetivo caracterizar quimicamente o extrato da planta O. ficus-indica e determinar sua eficácia no controle in vitro de parasitos de ovinos. Para tanto, foi obtido o extrato hidroalcoólico da casca dos cladódios da O. ficus-indica, denominado OFIEOH. Este extrato foi avaliado quanto à sua composição química através de dosagens colorimétricas para o teor de carboidratos, proteínas, fenóis e taninos condensados, e por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para caracterização do perfil de compostos fenólicos constituintes. O OFIEOH apresentou maiores teores de fenóis (52,15% ±7,48), identificados como flavonoides quercetínicos, além de ácido caféico. Para a avaliação da atividade antiparasitária in vitro, foram realizados testes de eclodibilidade do ovo (TEO) e o teste de migração de larvas (TML). OFIEOH foi utilizado nas concentrações de 12,5 a 100 mg/mL para TEO e nas concentrações de 12,5 a 200 mg/mL para TML. A atividade antiparasitária do OFIEOH foi promissora, uma vez que para TEO a dose de 100 mg/mL da OFIEOH apresentou eficácia de 90% (±3,04) e para o TML, na concentração de 200 mg/mL o OFIEOH inibiu 77,26% (±0,66) da migração larvar. Além disso, também foi realizado o TML em interação farmacológica, testando doses de ivermectina (IVM, 10 a 50 mg/mL) associadas a CL50 da OFIEOH, e doses de OFIEOH (12,5 a 200 mg/mL) associadas a CL50 da IVM. A interação destes compostos foi eficiente para promover a inibição da migração larvar, tendo sido verificada uma eficácia dose-dependente de 73,78% (±06,11) para a associação de 50 mg/mL IVM + CL50 da OFIEOH, e uma eficácia de 62,49% (±2,1) para a associação da dose de 200 mg/mL da OFIEOH + CL50 da IVM. Observou-se também que a associação das doses de IVM com a CL50 da OFIEOH apresentaram um efeito de neutralização entre os compostos, enquanto que um antagonismo foi observado na interação das concentrações de OFIEOH associadas a CL50 da IVM. Diante do exposto, foi evidenciado que o extrato de O. ficus-indica apresenta potencial atividade antiparasitária. Esta ação pode estar relacionada com a presença dos compostos fenólicos, principalmente, flavonoides quercetínicos que foram compostos identificados com maior intensidade no espectro. Com isso pode-se afirmar que o extrato da casca da palma forrageira (O.ficus-indica) possui compostos bioativos com características específicas que apresentam atividade antiparasitária sobre nematódeos gastrintestinais de ovinos. Palavras-chave: parasitose, plantas medicinais, interação.Abstract: The sheep production is increasing in the different regions of the country and, nowadays, this growth is allied to the searching for quality products and food security. In order to obtain a good sheep production rates, it is essential to ensure the animals healthy, especially with regard to parasitosis. In this context, the demand for free chemical residues and the intense emergence of gastrointestinal parasites with resistance to convetional antiparasites drugs, due to their indiscriminate use, raised the interest in finding new alternatives of parasitic control. Among the various alternatives, phytotherapy stands out,this uses the advantages of the bioactive components of plants for pharmacological use.Among the various plants studied is O. ficus-indica, known as "palma forrageira". O. ficus-indica has several bioactive compounds such as phenolic compounds that have anti- inflammatory, antioxidant and potentially anti-helminth activity. However, few studies have evaluated the composition and capacity of this plant for its effect on gastrointestinal nematodes of sheep.Thus, this study aimed to characterize chemically the extract of the plant O. ficus-indica and to determine its effectiveness in the in vitro control of sheep parasites. This work is divided into three chapters. The second one presents a literature review, contextualizing the theme on the main gastrointestinal nematodes of sheep, parasitic resistance and alternative controls, emphasizing phytotherapy. The third chapter presents the results of the chemical characterization of the extract of O. ficus-indica and its anthelmintic activity. For that, the hydroalcoholic extract of the cladodes bark of O. ficus- indica, denominated OFIEOH, was obtained.This extract was evaluated for its chemical composition through colorimetric dosages for the carbohydrate, protein, phenol and condensed tannin content, and by high performance liquid chromatography (HPLC) to characterize the profile of constituent phenolic compounds. The OFIEOH presented higher phenolic contents (52.15% ± 7.48), and the quercetin flavonoids were characterized in greater quantity, besides that caffeic acid. In order to evaluate the antiparasitic activity in vitro, egg hatchability (TEO) and larval migration test (TML) were performed. OFIEOH was used at concentrations of 12.5 to 100 mg / mL for TEO and at concentrations of 12.5 to 200 mg / mL for TML. The antiparasitic activity of OFIEOH was promising, since for the 100 mg / mL dose of OFIEOH showed 90% efficacy (± 3.04) and for TML, at the concentration of 200 mg / mL OFIEOH inhibited 77 , 26% (± 0.66) of the larval migration. In addition, TML was also performed in drug-drug interaction by testing doses of ivermectin (IVM, 10 to 50 mg / mL) associated with OFIEOH LC50, and doses of OFIEOH (12.5 to 200 mg / mL) Associated with IVM LC50. It was found that the mixture of these compounds was efficient to promote inhibition of larval migration, and a dose-dependent efficacy of 73.78% (± 06.11) was observed for the association of 50 mg / mL IVM + OFIEOH CL50 , And an efficacy of 62.49% (± 2.1) for the combination of the 200 mg / mL dose of OFIEOH + LC50 from IVM. It was also observed in the drug-drug interaction that the association of the IVM doses with the OFIEOH LC50 showed a neutralizing effect between the compounds, while an antagonism was observed in the interaction of the IVM LC50 associated OFIEOH concentrations of IVM.In the above, was evidenced that the extract of O. ficus-indica presents potential antiparasitic activity. This action may be related to the presence of phenolic compounds, mainly quercetins flavonoids, which were indentified in more intensity in the spectra .With this, it can be stated that the extract of the bark of the "palma forrageira" (O.ficus-indica) has bioactive compounds with specific characteristics that present antiparasitic activity in gastrointestinal sheep nematodes. Key words: parasitosis, medicinal plants, interaction