Produção de insumos para imunodiagnóstico de herpesvírus bovino 1 e 5

Resumo: As infecções causadas por herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5), membros da família Herpesviridae, têm sido associadas a apresentações clínicas e subclínicas nesta espécie animal. As similaridades genômica e antigênica entre ambos representam um grande desafio para o diagnóstico laboratorial destas infecções. Os objetivos do presente estudo foram inicialmente identificar duas cepas (A e B), isoladas de casos clínicos, pelas técnicas de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e Análise de Enzima de Restrição (REA) utilizando o gene da glicoproteína C (gC) e enzima BglI, respectivamente. Os amplicons obtidos para as referidas amostras apresentaram bandas em torno de 572 a 575 pb, respectivamente. Na REA, a amostra B apresentou dois fragmentos (333 pb e 239 pb) enquanto que a amostra A permaneceu com um único fragmento de aproximadamente 572 pb. O sequenciamento parcial dos genes da gC revelou 572 nucleotídeos para a amostra A compatível com o BoHV-1 do sub tipo 1.1. A amostra B indicou 575 nucleotídeos e foi agrupada com o BoHV-5. Na segunda etapa deste estudo a amostra B foi utilizada para produzir 61 hibridomas produtores de anticorpos monoclonais (AcMc) anti-BoHV-5 dos quais apenas dois (8E11 e 3B2) reagiram com a cepa BoHV-5 sendo tal reação revelada pelo teste de imunoperoxidase (IPX). A última etapa deste trabalho referiu-se à construção de um plasmídeo recombinante para a expressão da proteína gG126 do envelope da cepa A (BoHV-1). Os primers desenhados foram amplificados, clonados e expresso em E. coli. A atividade da proteína produzida foi testada frente a soros bovinos positivos, hiperimunes e negativos contra BoHV-1. Soros hiperimune e AcMc anti-BoHV-5 também foram testados. A proteína recombinante mostrou reatividade frente aos soros bovinos positivos e hiperimune anti-BoHV-1, bem como ao soro hiperimune anti-BoHV-5. No entanto, não foi reconhecida quando submetida a soro anti-BoHV-1 negativo e anticorpos monoclonais anti-BoHV-5. Conclui-se, a partir dos resultados obtidos, que as técnicas moleculares são importantes ferramentas para caracterização de cepas de BoHV-1 e BoHV-5. Além disso, os AcMc anti-BoHV-5 e a proteína recombinante gG126 do BoHV-1 produzidos representam potenciais insumos para o desenvolvimento de testes diagnósticos visando estratégias futuras para o controle e prevenção das infecções pelos herpesvírus destes tipos