Indução de apoptose pelo extrato e frações de Lafoensia pacari A. St-Hill, Lythraceae, em células tumorais

Orientador: Prof. Tit. Cid Aimbiré de Moraes SantosCo-orientadora: Profª Drª Almeriane M. Weffort SantosDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 25/02/2013Inclui referênciasÁrea de concentração: Insumos, medicamentos e correlatosResumo: Este trabalho propôs-se a avaliar a influência do extrato metanólico das cascas do caule de Lafoensia pacari A. St.-Hil., Lythraceae, conhecida popularmente como dedal e com a indicação de seu uso para tratamento de câncer, primeiramente, sobre o comportamento das linhagens celulares leucêmicas humanas, U-937, Daudi e Jurkat, em sistemas de cultura in vitro. Os ensaios realizados com essas linhagens demonstraram claramente que o extrato e as frações preparados dessa planta exercem efeitos citostático e citotóxico significativos para as linhagens U-937, Daudi e Jurkat, os quais são independentes da presença do ácido elágico, marcador fitoquímico da espécie. Na avaliação do efeito tóxico pelo método de quantificação da lactato desidrogenase (LDH), o extrato e as frações hidrofóbica (F1) e ActOEt (F2) apresentaram toxicidade significativa a 100 ?g/mL, enquanto que as frações n- BuOH (F3) e aquosa (F4) em 1000 ?g/mL. O extrato de L. pacari foi capaz de inibir a formação de colônias de progenitores leucêmicos de células U-937 em meio semissólido. Citocentrifugados das mesmas linhagens tratadas com 1000 ?g/mL de extrato mostraram características típicas de apoptose, com a presença de vacúolos citoplasmáticos, condensação da cromatina, fragmentação do núcleo e formação de corpos apoptóticos. A exposição de células U-937, assim como outras representativas de câncer de colo do útero (HeLa), de cólon (HRT-18) e de neuroblastoma (SY5Y), além de células mononucleares (MNC) ao extrato de L. pacari levou à alterações características de apoptose no ciclo celular, bem como co-expressão da Anexina V e do 7-AAD. Interessante ressaltar que, em contraste com os resultados descritos para as linhagens tumorais, o extrato de L. pacari pouco interferiu na viabilidade ou influenciou na proliferação de células MNC de medula óssea de camundongos, como também apresentou maior indução de apoptose em células MNC isoladas do sangue periférico de voluntários sadios quando estimuladas com fitohemaglutinina, o que sugere que o efeito indutor de apoptose parece repousar sobre células que estão em atividade metabólica intensa e/ou que estejam em ciclo celular. Embora mais estudos sejam necessários, o conjunto de resultados apresentados revelou alguns aspectos interessantes e ainda não relatados com relação às atividades biológicas dessa espécie brasileira, sugerindo investigações futuras para assegurar seu uso com fins terapêuticos.Abstract: The aim of this work was to evaluate the influence of the methanolic extract and its fractions prepared from the stem barks of Lafoensia pacari A. St.-Hil., Lythraceae, popularly known as "dedal" and used for treating cancer, on the behavior of the human U-937, Daudi, and Jurkat leukemic cell lines, in in vitro culture systems. The assays conducted with these leukemic lineages have clearly shown their cytostatic and cytotoxic effects, which were independent of the presence of ellagic acid, the phytochemical marker of the species. Significant toxicity, determined by the quantification of lactate dehydrogenase (LDH), has been shown for the extract as well as for its hydrophobic (F1) and EtOAc (F2) fractions only at a 100 ?g/mL along with the n-BuOH (F3) and the aquous (F4) fractions at 1000 ?g/mL. The extract was also able to inhibit the formation of colonies by U-937 cells in clonogenic assays. Cytospun preparations of cells treated with 1000 ?g/mL of extract showed typical characteristics of apoptosis, with the presence of cytoplasmic vacuoli, chromatin condensation, nuclear fragmentation, and formation of apoptotic bodies. Exposition of U-937 cells as well as other cell lines representatives of cervical (HeLa), colon (HRT-18), and neuroblastoma (SY5Y) cancers, along with human mononuclear cells to L. pacari extract led to changes characteristics of apoptosis induction, including morphological aspects, alteration of the cell cycle status, and co-expression levels of Annexin V and 7-AAD. Interesting to note that, in contrast with the results described for the tumor cell lines, the extract has little interfered on the viability or influenced the proliferation of mice bone marrow mononuclear cells. Higher induction of apoptosis in peripheral blood mononuclear cells isolated from healthy volunteers was observed when these cells were stimulated to proliferate with phytohemagglutinin, suggesting that the effect of inducing apoptosis seems to rest on cells that are under intense metabolic activity or cycling. Although further studies are needed, the findings herein described revealed some interesting aspects not yet reported with respect to the biological activities of this species, suggesting future investigations to ensure its use for therapeutic purposes