Identificaçao e caracterizaçao de TcNUP-1, uma proteína de lâmina nuclear em Trypanosoma cruzi

Orientador: Stenio Perdigao FragosoTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 01/06/2006Inclui bibliografia e anexosÁrea de concentraçao: Biologia celular e molecularA lâmina nuclear é uma estrutura fibrilar protéica que está abaixo da membrana nuclear interna. Nos metazoários, as laminas são os componentes estruturais principais dessa estrutura e estão envolvidas em diversos processos nucleares. Os eucariotos que não possuem laminas apresentam proteínas distintas com funções homólogas. Recentemente foi identificada uma proteína com domínio coiled-coil em Trypanosoma brucei, NUP-1, como o componente filamentoso principal da lâmina nuclear. Entretanto, seu papel exato ainda não foi definido. Com a intenção de sugerir funções para a lâmina nuclear em tripanossomatídeos, nós caracterizamos uma proteína ortóloga à NUP-1 em Trypanosoma cruzi. A TcNUP-1 é uma proteína com alta massa molecular e domínios coiled-coil e que está localizada na periferia nuclear. Utilizando ensaio de imunoprecipitação de cromatina, nós identificamos alguns de seus sítios de ligação com o DNA. Após a análise das seqüências encontradas, pudemos observar uma associação clara com fragmentos de DNA contendo genes e pseudogenes da família das trans-sialidases, membros da família da proteína gp85 e seqüências relacionadas à SIRE, que estão comumente associadas às regiões subteloméricas dos cromossomos do T. cruzi. Baseados nos nossos resultados, nós sugerimos que TcNUP-1 é uma proteína estrutural responsável por ancorar as extremidades dos cromossomos ao envelope nuclear e que, portanto, apresenta um papel essencial na organização nuclear do T. cruziThe nuclear lamina is a structure lining the inner nuclear membrane. In metazoans, lamins are the primary structural components of nuclear lamina and are involved in several processes. Eukaryotes lacking lamins present distinct proteins with homologous functions. Recently it was identified a coiled-coil protein in Trypanosoma brucei, NUP-1, as the major filamentous component of its nuclear lamina. However, its precise role has not been defined. To shed light to this question, we characterized a homologous protein in Trypanosoma cruzi, TcNUP-1 and identified some of its in vivo DNA binding sites using chromatin immunoprecipitation assay (ChIP). We found a clear association of the TcNUP-1 with DNA sequences containing (pseudo)genes from the ts (trans- sialidase)-like family, members of gp85 gene family and sequences related to SIRE (short interspersed repetitive element), which are commonly associated to the subtelomeric region of the T. cruzi chromosomes. Based on our results, we suggest that TcNUP-1 is a structural protein having an essential role in nuclear organization by anchoring the ends of the T. cruzi chromosomes to the nuclear envelope