Prevalência e perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos de bactérias enteropatogênicas isoladas no Paraná

Orientadora : Profa. Dra. Cyntia M. T. Fadel PichethDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 23/03/2012Bibliografia: fls. 85-112Área de concentração: Análises clínicasResumo: As doenças diarreicas são um grave problema de saúde pública e permanecem como uma das principais causas de mortalidade infantil. O objetivo deste estudo foi determinar a frequência de estirpes diarreogênicas de E.coli (DEC), Salmonella spp, Shigella spp, Campylobacter spp, Yersinia enterocolitica, Vibrio spp, Aeromonas e Plesiomonas shigelloides em amostras de fezes diarreicas de adultos e crianças no estado do Paraná. Foram utilizados métodos microbiológicos convencionais para a cultura e identificação desses patógenos e a reação em cadeia da polimerase para vários genes alvo (PCR multiplex) para a detecção, isolamento e caracterização das estirpes DEC. A determinação do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos das bactérias isoladas foi feita utilizando E-test para Campylobacter e disco-difusão para as demais. Um total de 400 amostras fecais foi analisado, sendo 305 provenientes do Laboratório Central do Estado do Paraná (LACEN/PR) e 95 do Laboratório Municipal de Curitiba (LMC). No total, o índice de positividade foi de 20,7%. Os patógenos isolados e as respectivas frequências são: Salmonella spp (9,2%), Aeromonas spp (6,5%), estirpes de E. coli diarreogênicas (5,2%) e Campylobacter (1%). Não foram detectados casos de diarreia associados com Shigella spp, Yersinia enterocolitica, Vibrio spp, P. shigeloides, EIEC e ETEC. Exceto para Salmonella spp, para a qual foi observada uma diferença estatisticamente significativa (p=0,0066) quanto a freqüência nas amostras do LACEN (11,5%) e do LMC (2,1%), não houve diferença significativa nas freqüências dos outros enteropatógenos isolados nas amostras dos dois laboratórios. A frequência de Salmonella em crianças de 0 - 5 anos foi significativamente menor (p=0,022) que nas demais faixas etárias. Nas amostras provenientes do LACEN Salmonella spp foi a bactéria isolada com maior freqüência (11,5%) e Aeromonas (11,6%) nas amostras do LMC, sendo A. caviae (8,4%) a espécie predominante. As E. coli diarreogênicas contribuíram com uma parcela significativa (5,2%) dos casos de diarréia sendo aEPEC (3,2%) o principal patotipo isolado. C. jejuni foi isolado em frequência de 1%. Resistência a um ou mais antimicrobianos foi detectada em todos os grupos de patógenos isolados neste estudo. A resistência mais comum entre as estirpes de Salmonella foi ao ácido nalidíxico (83,8%) seguido por cloranfenicol, ampicilina e sulfametoxazol/trimetoprim (10,8%). Entre as estirpes de Aeromonas a resistência mais comum foi à ampicilina (96,1%, resistência intrínseca) como esperado, seguida por amoxicilina/ácido clavulânico (26,9%). Entre as estirpes de DEC, 47% foram sensíveis à todos os antimicrobianos testados, sendo a resistência à ampicilina (52,4%) a mais comum entre essas bactérias. Entre as estirpes de C. jejuni, resistência à ciprofloxacina foi observada em 75% dos isolados, e à tetraciclina em 25%, sendo todas as estirpes sensíveis à eritromicina. Os resultados deste trabalho mostram que Salmonella, Aeromonas e as E. coli diarreogênicas são as principais causas de diarreia de origem bacteriana no Paraná. Entretanto Aeromonas e DEC não fazem parte dos patógenos pesquisados na coprocultura nos laboratórios clínicos. A freqüência encontrada para estes patógenos no Paraná justifica que sejam incluídos nas análises de rotina nas coproculturas.Abstract: Diarrheal diseases are a serious public health problem and remain a major cause of infant mortality. The aim of this study was to determine the frequency of diarrheogenic E. coli (DEC), Salmonella spp, Shigella spp, Campylobacter spp, Yersinia enterocolitica, Vibrio spp, Aeromonas spp and Plesiomonas shigelloides in samples of diarrheal stools of adults and children in the state of Paraná. Conventional microbiological methods were used for culture and identification of pathogens, and polymerase chain reaction to various target genes (multiplex PCR) for the detection, isolation and characterization of the DEC strains. The antimicrobial susceptibility profile of the isolates was determined using test for Campylobacter and disk diffusion for other bacteria. A total of 400 stools samples were analyzed, being 305 from the Central Laboratory of Paraná State (LACEN / PR) and 95 from the Municipal Laboratory of Curitiba (LMC). Overall the frequency of positive tests was 20.7%. The pathogens found and respective frequencies are: Salmonella (9.2%), Aeromonas (6.5%), diarrheogenic E. coli (5.2%) and Campylobacter (1%). There were no detected cases of diarrhea associated with Shigella spp, Yersinia enterocolitica, Vibrio spp, P. shigeloides EIEC and ETEC. Except for Salmonella spp, for which a statistically significant difference was found (p = 0.0066) between the frequencies found in samples from LACEN (11.5%) and LMC (2.1%), no significant difference was found in the frequencies of the other enteropathogens isolated from samples of these laboratories. Salmonella frequency among children 0-5 years older was significantly lower (p=0,022) than in the other age groups. In samples from LACEN Salmonella were the most frequent pathogen isolated (11.5%) and Aeromonas (11.6%) in samples of the LMC, being A. caviae (8.4%) the predominant species. The diarrheogenic E. coli were responsible for a significant proportion (5.2%) of diarrhea cases and aEPEC (3.2%) was the major pathotype of DEC isolated. C. jejuni was isolated in frequency of 1%. Resistance to one or more antimicrobials was detected in all groups of pathogens isolated in this study. The most common resistance among Salmonella strains was to nalidixic acid (83.8%) followed by chloramphenicol, ampicillin and trimethoprim / sulfamethoxazole (10.8%). Among the Aeromonas strains resistance to ampicillin was the most common (96.1%, intrinsic resistance) as expected, followed by amoxicillin / clavulanate (26.9%). Among the strains of DEC 47% were sensitive to all antibiotics tested, and the ampicillin resistance (52.4%) was the most common among these bacteria. Among the C. jejuni strains, ciprofloxacin resistance was observed in 75% of the isolates, and tetracycline in 25%, all strains were sensitive to erythromycin. The results of these study show that Salmonella, Aeromonas and diarrheogenic E. coli are the major causes of bacterial diarrhea in Paraná State. However Aeromonas and DEC are not sought in the stool culture for enteropathogens in clinical laboratories. The frequency found for these pathogens in Paraná warrants its inclusion in the routine analysis