Estudo da resposta inflamatória associada à apoptose em células dendríticas derivadas de monócitos humanos induzida pela infecção de vírus Degue Soropositivo 3.

Orientadora : Drª Claudia N. Duarte dos SantosCo-Orientador: Juliano BordignonDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba,28/02/2011Bibliografia: fls. 76-92Resumo: A Dengue (DEN) representa atualmente um dos mais graves problemas de saude publica no mundo. A OMS estima que cerca de 80 milhoes de pessoas se infectem anualmente em mais de 100 paises. A DEN e causada por um dos quatro sorotipos do virus dengue (DENV 1-4), sendo transmitida ao homem atraves da picada de mosquitos do genero Aedes spp. As apresentacoes clinicas decorrentes da infeccao por qualquer um dos sorotipos de DENV podem variar desde a Febre da Dengue (FD), a Febre Hemorragica da Dengue (FHD), podendo progredir para a Sindrome do Choque da Dengue (SCD). A FD e caracterizada por sintomas inespecificos como cefaleia, febre, artralgia, mialgia, nauseas, vomitos e exantemas. Ja a FHD, alem dos sintomas da FD, se caracteriza tambem por hemorragias, trombocitopenia e extravasamento de soro dos vasos sanguineos para o tecido basal, o que e atribuido ao aumento da permeabilidade vascular. As celulas dendriticas (DCs do ingles dendritic cells) sao alvo primario da infeccao pelos DENV, sendo ainda as mais eficientes celulas apresentadoras de antigenos (APCs do ingles Antigen Presentation Cells), realizando um papel essencial na captura, processamento e transporte de antigenos ate os linfonodos. Com o intuito de obter novos conhecimentos sobre a interacao de DENV e celulas hospedeiras, este trabalho objetivou o estudo da resposta de celulas dendriticas derivadas de monocitos humanos (mdDCs), infectadas com diferentes cepas de DENV-3. Inicialmente, o isolado clinico rec nte PAR DENV3/5532-02, foi utilizado para infectar mdDCs em diferentes tempos. As analises demonstraram que as infeccoes destas celulas modulam uma serie de genes, pertencentes principalmente as seguintes ontologias: resposta imune, atividade catalitica, adesao e proliferacao celular. Com o intuito de expandir os conhecimentos relacionados a resposta das mdDCs a infeccao, outro isolado clinico, o BR DENV3/290-04, foi incluido no estudo. Os resultados mostraram que a cepa PAR DENV3/5532-02 infecta e induz apoptose em uma porcentagem maior de celulas, induz a uma maior producao de citocinas pro-inflamatorias (TNF-ƒ¿ e IL-6), em relacao a cepa BR DENV3/290-04, em 72h. Foi tambem demonstrado que a inducao de apoptose nestas elulas ocorreria tanto pela replicacao viral como por um efeito bystander, e nao pela acao direta do TNF-ƒ¿. Neste caso o TNF-ƒ¿ apresentou um efeito protetor nas culturas infectadas pelo DENV. Noss s dados sugerem que o isolado clinico PAR DENV3/5532-02 pode modular a sobrevivencia e funcao das mdDCs.Abstract: Dengue (DEN) is currently one of the most serious public health problems worldwide. The WHO estimates that about 80 million people become infected annually in over 100 countries. The DEN is caused by one of four dengue virus serotypes (DENV 1-4), and is transmitted to humans through the bite of mosquitoes of the genus Aedes. The clinical presentations resulting from infection by any of the serotypes of DENV may vary from Dengue Fever (DF) to the Dengue Hemorrhagic Fever (DHF), leading to the Dengue Shock Syndrome (DSS). The DF is characterized by nonspecific symptoms such as headache, fever, arthralgia, myalgia, nausea, vomiting and rashes. On the other hand, DHF have the same symptoms of DF, in addition to bleeding, thrombocytopenia and extravasation of serum from blood vessels to the basal tissue, which is attributed to increased vascular permeability. Dendritic cells (DC) are the primary target of infection by DENV and is still the most efficient antigen presenting cells (APC), fulfilling a key role in capturing, processing and transport of antigens to the lymph nodes. In order to gain further knowledge on the interaction of DENV and host cells, this work aims to study the response of DC derived from human monocytes (mdDCs), infected with different strains of DENV-3. Initially, a recent clinical isolate PAR DENV3/5532-02 was used to infect mdDCs at different times. Analysis showed that infection of these cells odulates a number of genes, belonging mainly to the following ontologies: immune response, catalytic activity, cell adhesion and proliferation. In order to expand the knowledge related to the response of mdDCs to infection, another clinical isolate, BR DENV3/290-04 was included in the study. The results showed that PAR DENV3/5532-02 strain infects and induces apoptosis in a greater percentage of cells and leads to an ncreased production of proinflammatory cytokines (TNF-á and IL-6) in relation to strain BR DENV3/290-04 at 72. It was also showed that induction of apoptosis in these cells occurred by both viral replication and bystander effect and not by direct action of TNF-á. In this case TNF-á showed a protective effect in cultures infected with DENV. Our data suggest that the clinical isolate PAR DENV3/5532-02 can modulate the urvival and function of mdDCs