Estudo de efeitos antineoplásicos e toxicológicos da Gochnatia polymorpha ssp. floccosa em ratos com tumor Walker-256

Orientadora : Profª. Drª. Alexandra AccoDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 18/07/2014Inclui referênciasResumo: Objetivos: Nas últimas décadas, o câncer tornou-se um evidente problema de saúde pública em todo o mundo. A pesquisa com plantas medicinais para fins antineoplásicos vem se tornando cada vez mais consistente, a fim de ampliar as opções de tratamento. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a possível atividade antineoplásica e toxicidade da fração diclorometano (F1B), rica em lactonas sesquiterpênicas do subtipo guaionolideos, isolada da Gochnatia polymorpha ssp. flocossa frente ao modelo de carcinossarcoma Walker-256 em ratos. Materiais e Métodos: Após a inoculação subcutânea das células Walker-256 no membro pélvico direito de ratos Wistar machos, iniciou-se o tratamento por via oral com F1B na dose de 100 mg.kg-1 por 16 dias. A progressão tumoral foi avaliada durante este período. Após o tratamento foram avaliados os seguintes parâmetros: peso tumoral; estresse oxidativo hepático e tumoral (atividade da catalase [Cat], superóxido dismutase [SOD], glutationa-S-transferase [GST], glutationa reduzida [GSH] e peroxidação lipídica); bioquímica plasmática (transaminases ALT e AST, fosfatase alcalina, ureia, creatinina, amilase, proteínas totais e glicemia); parâmetros inflamatórios no tecido tumoral (atividade da mieloperoxidade [MPO], N-acetilglucosaminidase [NAG], dosagem de óxido nítrico e de TNF-?) e histologia hepática e tumoral. A toxicidade da F1B constou da avaliação do peso relativo dos órgãos (fígado, rins, pulmão e baço), além da determinação de sua DL50 em camundongos. Resultados: O tratamento com a F1B produziu uma redução significativa no volume (74%) e no peso tumoral (69%) do carcinossarcoma Walker-256. Não houve diferença nos parâmetros de estresse oxidativo avaliados no tecido tumoral. No entanto, a F1B modificou parâmetros de estresse oxidativo hepático, aumentando os níveis de GSH e restabelecendo a atividade da SOD a valores normais. Ainda, normalizou a glicemia, assim como os níveis de fosfatase alcalina e amilase. Não houve diferença em relação às atividades das enzimas MPO e NAG, bem como nos níveis de óxido nítrico. Porém, houve uma redução nos níveis de TNF-? no tecido tumoral. Além disso, a F1B promoveu aumento da apoptose tumoral avaliada na histologia. Não foram observados sinais clínicos de toxicidade e mortes nos ratos tratados com a F1B. A DL50 calculada para camundongos foi de 1209 mg.kg-1. Conclusões: O tratamento com a F1B, isolada da Gochnatia polymorpha ssp. flocossa, na dose de 100 mg.kg-1 mostrou atividade antitumoral contra o carcinossarcoma Walker-256. Este efeito pode estar relacionado, pelo menos em parte, à indução da apoptose e a uma possível inibição na sinalização celular mediada por TNF-? através das lactonas sesquiterpênicas do subtipo guaionolideos, presentes nessa fração. Palavras-chaves: Gochnatia polymorpha ssp. floccosa, carcinossarcoma Walker-256, estresse oxidativo, fígado, toxicidade aguda (DL50).Abstract: Aim of the study: In recent decades cancer became an evident public health problem worldwide. A survey of medicinal plants for anticancer purposes is becoming increasingly more consistent with the objective of expanding treatment options. Therefore, the aim of this study was to evaluate the possible antineoplastic activity and toxicity of dichloromethane fraction (F1B), rich in sesquiterpene lactones subtype guaionolide, isolated of Gochnatia polymorpha ssp. flocossa against the Walker-256 carcinosarcoma in rats. Materials and Methods: After the subcutaneous inoculation of Walker-256 cells in the right pelvic limb of male Wistar rats, we started orally treatment with F1B at a dose of 100 mg.kg-1 for 16 days. The tumor progression was assessed during this period. After the treatment the following parameters were evaluated: tumor weight; oxidative stress in liver and tumor (activity of catalase [Cat], superoxide dismutase [SOD], glutathione-S-transferase [GST], reduced glutathione [GSH] and lipid peroxidation); plasma biochemistry (transaminases ALT and AST, alkaline phosphatase, urea, creatinine, amylase, total protein and glucose); inflammatory parameters in tumor tissue (activity of myeloperoxidase [MPO], N- acetylglucosaminidase [NAG], measurement of nitric oxide and TNF-?), and liver and tumor histology. The toxicity of F1B consisted of assessing the relative weight of the organs (liver, kidney, lung and spleen), and the determination of its LD50 in mice. Results: F1B treatment produced a significant reduction in the tumor volume (74%) and weight (69%) of the Walker-256 carcinosarcoma. There was no difference in oxidative stress parameters evaluated in tumor tissue. However, F1B treatment modified hepatic oxidative stress parameters, increasing the levels of GSH and restoring to normal SOD activity. Additionally, it normalized the plasmatic glucose and the levels of alkaline phosphatase and amylase. There were no differences regarding MPO and NAG activities, as well as the nitric oxide levels. However, there was a reduction in the TNF-? level of tumor. F1B also promoted increased apoptosis in the tumor assessed from tumor histology. No clinical signs of toxicity and death were observed in rats treated with F1B. The LD50 calculated for mice was 1209 mg.kg-1. Conclusion: Treatment with F1B, isolated from Gochnatia polymorpha ssp. flocossa, at the dose of 100 mg.kg-1, showed antitumor activity against the Walker-256 carcinosarcoma. This effect may be related, at least in part, to the induction of apoptosis and the inhibited cell signaling mediated by TNF-? through the sesquiterpene lactones, subtype guaionolide, present in this fraction. Keywords: Gochnatia polymorpha ssp. floccosa, Walker-256 carcinosarcoma, oxidative stress, liver, acute toxicity (LD50)