Seleção de leveduras isoladas de uvas como fonte de Pectinases

Orientadora : Profª. Drª. Tania Maria Bordin BonfimCoorientadora : Profª. Drª. Debora BrandDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 26/02/2016Inclui referências : f. [65-70]Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatosResumo: As pectinases, também denominadas enzimas pectolíticas, pectinolíticas ou pécticas, pertencem à família de polissacaridases que atuam na quebra das substâncias pécticas. Apresentam aplicações em diversos setores industriais, com destaque para a indústria de bebidas, na qual podem ser utilizadas para a clarificação e redução da viscosidade de sucos de frutas e no tratamento preliminar de suco de uva para a produção de vinho. As pectinases podem ser produzidas por fungos filamentosos, bactérias e leveduras. As leveduras apresentam crescimento relativamente simples, geralmente produzem apenas um tipo de pectinase e usualmente não produzem pectina esterase. Assim, podem ser alternativas em relação à produção por fungos filamentosos. O objetivo deste trabalho foi selecionar leveduras isoladas de uvas do estado do Paraná com ação pectolítica. Para isso, foi desenvolvida uma metodologia, com a determinação do meio de cultura, do reagente de precipitação, do tempo de contato com o reagente e do tempo para a leitura dos halos de degradação. A metodologia desenvolvida foi utilizada para a seleção de leveduras pectolíticas. A suspensão de cada levedura isolada foi inoculada de forma pontual em placas de Petri contendo o meio de cultura YNB-pectina. As placas recém-inoculadas foram colocadas em incubadora a 28 °C. Depois de 96 horas de crescimento, foi adicionada a solução de brometo de hexadecil trimetil amônio 1%, que permaneceu em contato com a superfície do meio de cultura por 30 minutos. Após 24 horas da adição do reagente, foi realizada a medida dos halos de degradação com paquímetro. Das 164 leveduras avaliadas, 58 apresentaram formação de halo de degradação. Os 7 isolados que apresentaram os diâmetros dos halos de degradação maiores que 10 mm foram selecionados e identificados como Saccharomyces cerevisiae por PCR-RFLP. Este foi o primeiro trabalho realizado para a verificação da produção de pectinases por leveduras isoladas de uvas do estado do Paraná. As linhagens selecionadas podem ser de interesse para a produção de vinhos. Palavras-chave: Pectinases. Leveduras autóctones. Uvas.Abstract: Pectinases, also denominated pectolytic, pectinolytic or pectic enzymes, belong to the family of polysaccharidases that breakdown pectic substances. These enzymes can be applied in several industrial sectors, especially in the beverage industry, where they can be used in clarification and reduction of viscosity of fruit juices and in preliminary treatment of grape juice for wine production. Pectinases can be produced by filamentous fungi, bacteria, and yeasts. The growth of yeasts is relatively simple, they generally produce only one type of pectinase, and usually do not produce pectin esterase. Yeasts pectinases can be an alternative to fungal pectinases. The aim of this study was to select yeasts isolated from grapes cultivated in the Paraná state with pectolytic action. An assay was developed evaluating the culture medium, the precipitating reagent, the contact time with the reagent, and the time for the measurement of the degradation halo. The assay was used for the selection of pectolytic yeasts. The suspension of each isolate was point-inoculated on plates containing YNB-pectin culture medium. The plates inoculated were incubated at 28 °C for 96 hours and then flooded with a 1% solution of hexadecyltrimethylammonium bromide, for 30 minutes. After 24 hours of the addition of the reagent, the degradation halo was measured with a paquimeter. Out of 164 yeasts evaluated, 58 showed formation of degradation halo. The seven isolates that showed degradation halos higher than 10 mm were selected and identified as Saccharomyces cerevisiae by PCR-RFLP. This is the first study realized to verify the pectinase production by yeasts isolated from grapes cultivated in Paraná state. The selected strains could be of interest in wine production. Keywords: Pectinases. Autochthon yeasts. Grapes