Imunolocalização do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-I) e do fator de crescimento epidermal (EGF) em ovários caninos e seus efeitos sobre a maturação in vitro de oócitos: avaliação nuclear

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito dos fatores de crescimento IGF-I e EGF sobre a maturação nuclear de oócitos caninos e também imunolocalizar estes fatores em amostras de ovários de cadelas. Foram selecionados 787 complexos cumulus-oocitos (COCs), provenientes de ovários de 34 cadelas, em diferentes fases do ciclo estral, submetidas a ovário-histerectomias eletivas. Os COCs foram dividos em três grupos para diferentes tratamentos, A (TCM 199, n=199), B (TCM 199 + 100ng/mL de EGF, n=208) e C (TCM 199 + 100 ng/mL IGF-1, n=204). Após 96 horas de incubação a 38 °C em atmosfera de 5% de CO2, 50% dos oócitos, desprovidos das células do cumulus, de cada grupo foram corados com Bisbenzimida H33342 (Hoechst) e 50% com 4',6-Diamidino-2-phenylindole (Dapi). A adição de EGF ou de IGF-1 ao meio TCM 199 não foi benéfica à maturação in vitro (MIV) de oócitos de cadelas, e a coloração Hoechst foi mais eficaz para a avaliação dos estágios de maturação nuclear de oócitos de cadelas. Os tratos reprodutivos das 34 cadelas foram coletados, fixados, processados e incluídos em parafina. Os fragmentos de ovários foram cortados, montados em lâmina, desparafinIzados e reidratados. A técnica de Imuno-histoquímica foi realizada utilizando os seguintes anticorpos: Anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem), Anti- IGF-1-pc (Ab-2, Calbiochem). As amostras foram incubadas overnight. O anticorpo primário foi detectado utilizando IgG secundária biotinilada de cabra anti-coelho ou de coelho anti-cabra, com complexo avidina-biotina-peroxidase. A detecção da reação foi feita com o AEC (Vector). A imuno-histoquímica revelou a presença de EGF e do IGF-1 no ovário da cadela. O EGF foi imunolocalizado no citoplasma das células foliculares (CF) e nos oócitos de folículos secundários e terciários e também na parede vascular, nos cordões...The aim of the present study was to assess the effect of the addition of EGF or IGF-1 to the culture medium TCM 199 on nuclear maturation of canine oocytes and to determine the distribution of these growth factors in the ovary of the bitch. 787 comulus-oocyte complexes (COCs) were sampled during different phases of the oestral cycle from 34 bitches submitted to elective ovariohysterectomy. The COCs were distributed into three groups: A (TCM 199, n= 199); B (TCM 199 + 100ng/ml of EGF, n=208) and; C (TCM 199 + 100ng/ml of IGF-1, n=204). Following 96 hours of incubation at 38 ºC, in sterile atmosphere with 5% CO2, the nuclear maturation stage was evaluated following bisbenzimide 33342 (50%) or 4',6-Diamidino-2-phenylindole staining (50%). The addition of EGF or IGF-1 to the TCM 199 did not favour the IVM of canine oocytes. The bisbenzimide 33342 staining was better than 4',6-Diamidino-2- phenylindole staining in the assessment of nuclear maturation stage of canine oocytes. . Reproductive tracts from 34 bitches at the different phases of the estrous cycle were collected, fixed and processed with paraffin embedding. Sections were cut, mounted, dried, deparaffinized and rehydrated. Immunocytochemistry was performed using a dilution of the following antisera: anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem) and Anti-IGF-1-pc (Ab- 2, Calbiochem ). Samples were incubated overnight. Primary antibody binding was detected using a biotynilated secondary goat-anti-rabbit or rabbit anti-goat IgG with avidin-biotin-peroxidase complexing. The detection reagent was AEC (Vector). Immunohistochemistry revealed the presence of EGF and IGF-1 in the ovary of the bitch. EGF was localized in the cytoplasm, while IGF-1 staining was nuclear. EGF was immunolocalized in the follicular cells (FC) and in... (Complete abstract click electronic access below)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES