Entwicklung eines Testsystems für die Genotoxizität von chemischen Substanzen

Es wurde nach einem Verfahren gesucht, um durch genotoxische Substanzen verursachte primäre DNA-Schäden direkt durch Bindung von DNA-Reparaturenzymen nachzuweisen. Nach Arbeiten mit Proteinen des menschlichen Reparatursystems für Fehlpaarungen wurden die bakteriellen Enzyme UvrA und UvrB der Ausschnittsreparatur auf ihre DNA-Bindungseigenschaften hin untersucht. Durch Polarisationsmessungen ergab sich eine deutlich stabilere Bindung von UvrB an geschädigte DNA als an ungeschädigte DNA. Dieser Unterschied wurde zur Entwicklung eines patentierten Immunassays in Mikrotiterplatten genutzt (Pat. Nr. 100 30 452). Hierbei wird die behandelte DNA immobilisiert und an DNA-Schädigungen gebundenes UvrB durch Antikörper detektiert. Mit dieser Methode konnten sowohl UV-Licht als auch durch genotoxische Substanzen induzierte DNA-Schäden nachgewiesen werden. Die entwickelte Methode ist hochsensitiv und spezifisch und kann automatisiert werden