Flavoproteins in directed evolution

In der vorliegenden Arbeit wurden zwei Enzyme, eine Enoatreduktase (YqjM) und eine Monooxigenase (\(P450_{BM3}\)), mittels "Gerichteter Evolution" auf die Akzeptanz neuer Substrate angepasst. Mittel iterativem CASTing (combinatorial active site saturation test) konnten in beiden Fällen hoch regio- und stereoselektive Mutanten erhalten werden. Zusätzlich wurde Kontrolle über die Enantioselektivität (YqjM) und Regioselektivität (\(P450_{BM3}\)) erreicht. Ein weiterer Aspekt der Arbeit war die Untersuchung der Methodik und ihrer Anwendung. Das so erlangte Verständnis trägt dazu bei iteratives CASTing effizienter anzuwenden.Two enzymes, an enoate reductase (YqjM) and a monooxygenase (\(P450_{BM3}\)), were successfully altered towards acceptance of new substrates applying directed evolution. Using iterative CASTing (combinatorial active site saturation test) highly regio- and stereoselective mutants were obtained in both cases. Additionally it was possible to control the regioselectivity (\(P450_{BM3}\)) and enantioselectivity (YqjM) of the catalyzed reaction. Moreover this work was used to shed more light on the iterative CASTing methodology and its application and the gained insights contribute to a more efficient application of the method