Proteom- und Phosphoproteom-Analyse humaner Primärhepatozyten und Lebermikrosomen unter pharmakologischen Aspekten

Mittels 2D-DIGE\(^{TM}\) und MALDI-MS-Analyse unter Verwendung des Gel-\(\it warping\)-Algorithmus RAIN wurde untersucht, wie die Dedifferenzierung humaner Primärhepatozyten sowie die Behandlung der Zellen mit Rifampicin auf das Proteom der Zellen wirkt. Die insgesamt 20 differenziellen Proteine wurden z.T. durch mRNA-Transkriptdaten und Western-Blotting validiert. Zusätzlich wurde das Phosphoproteommuster mittels spezifischer Pro-Q® Diamond-Gelfärbung untersucht. Im Weiteren konnte gezeigt werden, wie sich nanoLC-ESI-MS/MS dazu verwenden lässt, hoch homologe Cytochrom-P450-Isoformen (CYPs) zu differenzieren und semiquantitativ zu erfassen. Zusätzlich konnten 7 neue CYP-Phosphorylierungsstellen identifiziert werden. Es wurde daraufhin eine Methode zur Quantifizierung von CYPs und CYP-Phosphorylierungen auf Basis von nanoLC-MRM entwickelt. In einem Pilotversuch konnte erstmalig die Enzymdeaktivierung von CYP2B6 durch Phosphorylierung gezeigt werden