Die biochemische Analyse der Proteinacetylierung am Beispiel des HIV-1 Tat Proteins

Das HIV-1 Transaktivatorprotein Tat reguliert die transkriptionelle Aktivität des integrierten HIV-1 Provirus. Dazu wird Tat durch die Acetyltransferase p300/CBP an Lysin 50 acetyliert. Mit Hilfe von proteinanalytischen Methoden wie Massenspektrometrie, proteolytischem Verdau und Edman Sequenzierung wurde bestätigt, dass Lysin 50 die einzige Acetylierungsstelle von p300/CBP in Tat ist. Durch Analyse von Tat Mutantenpeptiden in Kombination mit transienten Transfektionsstudien und statistischer Auswertung von p300/CBP Substratproteinsequenzen konnten die für diese Modifikation kritischen Aminosäuren charakterisiert und zu potentiellen Substratsequenzen kombiniert werden. Datenbanksuchen mit diesen Sequenzen führten zur Identifizierung neuer Substrate von p300/CBP. Zusätzlich wurde gezeigt, dass Lysin 50 in Tat auch von der Acetylransferase pCAF acetyliert wird, und dass Cysteine unabhängig von der Peptidsequenz nichtenzymatisch acetyliert werden