Analysis of eicosanoids in biological samples using liquid chromatography and mass spectrometry

Eikosanoidy hrají důležitou roli při probíhajícím zánětu v lidském těle. Vznikají enzymatickou i neenzymatickou oxidací arachidonové kyseliny a jiných polynenasycených mastných kyselin. Pro analýzu eikosanoidů byla použita ultravysokoúčinná kapalinová chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií (UHPLC/MS) pracující v negativním módu elektrosprejové ionizace a s použitím trojitého kvadrupólového analyzátoru. Analyty byly separovány na koloně Acquity UPLC BEH C18 (2.1x150 mm, 1.7 μm). Všechny důležité parametry iontového zdroje, jako teplota iontového zdroje a průtoky plynů, byly optimalizovány tak, aby byla získána největší citlivost pro následnou SRM (Selected reaction monitoring) metodu. MS/MS spektra eikosanoidů vykazují více produktových iontů, avšak nejdůležitější produktový ion pro následné SRM byl ten s největší intenzitou. Kolizní energie byla optimalizována pro každý prekurzor/produkt iontový pár využitím SRM detekce. Tato metoda bude následně validovaná a aplikovaná na vzorky lidské plazmy.Eicosanoids play an important role in the ongoing inflammation in the human body. Eicosanoids are formed by the enzymatic or non-enzymatic oxidation of arachidonic acid or polyunsaturated fatty acids. For the analysis of eikosanoids, we used an ultrahigh-performance liquid chromatography (UHPLC) coupled to negative-ion electrospray ionization mass spectrometry using a triple quadrupole analyzer. Analytes were separated in reversed-phase mode using Acquity UPLC BEH C18 (2.1x150 mm, 1.7 μm) column. All important parameters, such as turbo ion spray source temperature, nebulizer, and turbo gas flow have been optimized to achieve the highest sensitivity for subsequent selected reaction monitoring (SRM) transitions. MS/MS spectra of eicosanoids show multiple product ions. The collision energy was optimized for each precursor / product ion pair used for SRM detection. This method will be validated and applied to samples of human plasma