Analýza oxylipinů v lidské plazmě: Srovnání ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie a ultra-vysokoúčinné superkritické fluidní chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií

The potential of ultrahigh-performance liquid chromatography–mass spectrometry (UHPLC/MS) and ultrahigh-performance supercritical fluid chromatography (UHPSFC) coupled to negative-ion electrospray ionization mass spectrometry (ESI–MS) for the analysis of 46 oxylipins and 2 fatty acid standards is compared in terms of their chromatographic resolution with the emphasis on distinguishing isobaric interferences and the method sensitivity. UHPLC provides the baseline separation of 24 isobaric oxylipins within 13 min, while UHPSFC enables the separation of only 20 isobaric oxylipins within 8 min. Moreover, the UHPLC/ESI–MS method provides an average improvement of sensitivity by 3.5-fold. A similar trend is observed in the analysis of human plasma samples, but lower ion suppression effects caused by lysophospholipids (LPL) are observed in case of UHPSFC/ESI–MS due to better separation of LPL. Both methods are fully applicable for the analysis of oxylipins, but UHPLC/ESI–MS method is preferred due to better separation and higher sensitivity, which results in the identification of 31 oxylipins in human plasma based on available standards and additional tentative 20 identifications based on accurate m/z values and the fragmentation behavior known from the literature.Porovnání technik ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie (UHPLC) a ultra-vysokoúčinné superkritické kapalinové chromatografie (UHPSFC) ve spojení s hmotnostně spektrometrickou detekcí a ionizací elektrosprejem v negativním módu pro analýzu 46 standardů oxylipinů a 2 standardů mastných kyselin. UHPLC umožňuje separaci 24 isobarických oxylipinů a to během 13 minut, zatímco technika UHPSFC umožňuje separaci pouze 20 isobarických oxylipinů během 8 minut. Navíc technika UHPLC / ESI-MS umožňuje v průměru 3,5 krát zvýšení citlivosti. Podobný trend je pozorován při analýze vzorků lidské plazmy, ale v případě metody UHPSFC/ESI-MS dochází k lepší separaci lysophospholipidů (LPL). Obě metody jsou použitelné pro analýzu oxylipinů, ale UHPLC/ESI-MS metoda je upřednostňována kvůli lepší separaci a vyšší citlivosti. Což vede k identifikaci 31 oxylipinů v lidské plazmě na základě dostupných standardů a dalších 20 oxylipinů předběžně určených podle jejich přesné m/z a fragmentačního chování známého z literatury