Karaktärisering av hund TK1 för användning som tumörmarkör

Thymidine kinase 1 (TK1) is an intracellular enzyme involved in "the salvage pathway" where the uncomplete parts of DNA are transformed into DNA precursors. The expression of TK1 is cell cykle specific, with the highest level during S-phase when DNA-synthesis is most active. One kind of TK1 is present in serum and an increase in TK1 activity in serum is due to either the level of DNA synthesis in the body or the number of cells dying in a state of replication. This can be used and is used as a marker for prognosis and evaluation of treatment in human patients with leukemia and lymphoma. A study has been performed in which the test evaluated for human medicine has been used on serum from dogs with malignant lymphoma. The purpose of the study was to evaluate wether serum levels of TK1 could be used as prognostic tumour marker in dogs as well as humans and the results are promising. The test commersially available today has been evaluated for human medicine and uses radioactivity, which makes it neither practical nor clinically useful in veterinary medicine. For this reason, a method enabling a simple and less expensive test is required. The purpose of this study is to explore the possibility of making specific anti- dog TK1 antibodies to be used in an ELISA. Antibodies have been produced by immunizing rabbits with a synthetic piece of a peptide of dog TK1. Serum from these rabbits was collected and mixed with dog cell extract with TK1 activity. The reduced activity has been used as a measurement of the antibodies capacity to bind dog TK1. This study shows that it is possible to produce antibodies specific to canine TK1 with adequate binding capacity. It has also been shown that these antibodies bind both human and canine TK1. These findings pave the way for further studies of these antibodies in order to develop an ELISA that is both cheap and reliable.Thymidin kinas 1 (TK1) är ett intracellulärt enzym som är involverat i ”the salvage pathway” där de ofärdiga byggstenarna till DNA omvandlas till DNA precursorer. TK1 uttrycks cellcykelspecifikt, med det största uttrycket i S-fas när DNA-syntesen är mest aktiv. En form av TK1 finns i serum och ökad aktivitet av TK1 i serum avspeglar antingen nivån av DNA-syntes i kroppen eller antalet celler som dör i stadier av DNA replikation. Detta kan användas och används som markör för prognos och utvärdering av behandling för bland annat leukemi och lymfom inom humanmedicin. Det har gjorts studier där testen som utvecklats för humanmedicin använts på serum från hundar med malignt lymfom för att utvärdera om serumnivåer av TK1 även kan användas som prognos för sjukdomsstadie och överlevnad på hund och resultaten ser lovande ut. De test som finns kommersiellt tillgängliga idag riktar sig till humanmedicin och använder sig av radioaktivitet, vilket gör att det inte är praktiskt eller ekonomiskt möjligt att använda dessa kliniskt inom veterinärmedicinen. Det behövs därför en metod som möjliggör ett billigt och enkelt test. I denna studie utvärderas om specifika antihund TK1 antikroppar kan framställas och därmed lägga grund för en ELISA. Antikroppar har framställts genom att kaniner immuniserats med en syntetisk peptiddel från hund TK1 och serum från dessa kaniner har sen samlats och blandats med hundcellsextrakt med TK1-aktivitet och sänkningen av aktiviteten har använts som mått på om antikropparna kunde binda hund TK1. I studien visas att det går att skapa artspecifika antikroppar som binder hund TK1 bra, samt antikroppar som binder både hund och humant TK1. Detta öppnar för vidare studier av antikropparna för att kunna utveckla en ELISA som är både billig och säker