Design and synthesis of analogues of the sequence 558-565 of A2 subunit of the factor FVIIIa of blood coagulation: relationship between structure and biological activity

Blood coagulation is important in the protection of bleeding from a body andperformed by the thrombin produced. In normal conditions bleeding is limited to localtrauma on the vessel, the diversion rate of thrombin production (increase) leads to anexpansion of its activities and the general circulation of the bloodstream. In theseconditions promotes local clotting (venous or arterial thrombosis), and when thethrombin generated is not controlled (by the mechanisms of inhibition), then producedwidespread intravascular thrombosis is called disseminated intravascular coagulation.Or in any way diverted thrombin production is undesirable.The process of platelets adhesion requires the presence of clotting factor VIII(FVIII), a necessary for the coagulation cascade glycoprotein (GP), which acts as acoenzyme for the activation of factor IX, a serine protease that depends on thethrombin production.This project refers to biologically active peptides, of the above sequence of A2subunit :Ser 558 - Val 559 - Asp 560 - Gln 561 - Arg 562 - Gly 563 - Asn 564 - Gln 565which are capable of the modified block-dependent FVIIIa and FIXa to maximize theproduction of thrombin and consequently the additional activation and plateletaggregation.Factor VIII consists of a heavy (A1-A2-B) and a light (A3-C1-C2) peptide chain.Based on the understanding that the sequence 558-565 of the A2 subunit in FVIIIainteraction with FIXa, we have synthesized several linear and circular (C-terminus toN-terminus) and peptidomimetics of the above sequence aiming at preventing theinteraction of FVIIIa with FIXa, to suspend the process of the activation of thrombinand blood coagulation.As coupling method is selected and the methodology followed Fmoc/tBu and tworesin-chlorotrityl-chloride (2-CLTR) for linear configurations, peptidomimetics acidsand cyclic peptide analogues and the MBHA Rink-amide resin for peptide amidesynthesis of analogues solid phase methodology and synthesis of peptides and similarcompounds in the liquid phase.The analogues are identified (NMR, RP-HPLC, ESI-MS, etc.), while they have beenexamined for their biological activity.Η πήξη του αίματος είναι σημαντική στην προφύλαξη ενός οργανισμού από αιμορραγίες και πραγματοποιείται με την παραγόμενη θρομβίνη. Η ενεργοποίηση όμως της πήξης σε φυσιολογικές συνθήκες περιορίζεται σε τοπικό επίπεδο πάνω στο τραύμα του αγγείου, που αιμορραγεί. Η εκτροπή του ρυθμού παραγωγής θρομβίνης (αύξηση) οδηγεί σε επέκταση της δράσης της μέσω της γενικής κυκλοφορίας του αίματος. Στις συνθήκες αυτές προάγεται η θρόμβωση ενίοτε τοπικά (φλεβική ή αρτηριακή θρόμβωση), ενώ όταν η παραγόμενη θρομβίνη είναι μη ελεγχόμενη (από τους μηχανισμούς αναστολής της) τότε παράγεται γενικευμένη ενδοαγγειακή θρόμβωση που καλείται διάχυτη ενδοαγγειακή πήξη. Η με κάθε τρόπο εκτροπή της παραγωγής θρομβίνης είναι ανεπιθύμητη. Η διαδικασία της προσκόλλησης αιμοπεταλίων απαιτεί την παρουσία του παράγοντα θρόμβωσης VIII (FVIII), μιας απαραίτητης για τον καταρράκτη πήξης γλυκοπρωτεΐνης (GP),ο οποίος ενεργεί ως συνένζυμο για την ενεργοποίηση του παράγοντα ΙΧ, μιας σερινοπρωτεάσης από την οποία εξαρτάται η παραγωγή θρομβίνης. Το παρόν ερευνητικό έργο αναφέρεται σε βιολογικώς ενεργά πεπτίδια ανάλογα τηςα λληλουχίας: Ser 558 - Val 559 - Asp 560 - Gln 561 - Arg 562 - Gly 563 - Asn 564 - Gln 565 τα οποία είναι ικανά να αναστέλλουν την εξαρτώμενη από τους FVIIIa και FIXα μεγιστοποίηση παραγωγής θρομβίνης και κατά συνέπεια την επιπλέον ενεργοποίηση και συγκόλληση των αιμοπεταλίων. Ο παράγοντας VIII αποτελείται από μια βαριά (Α1-Α2-Β) και μια ελαφριά (A3-C1-C2) πεπτιδική αλυσίδα. Βασιζόμενοι στην αποδοχή ότι η αλληλουχία 558-565 της A2υπομονάδας του FVIIIa αλληλεπιδρά με τον FIXa, έχουμε συνθέσει διάφορα γραμμικά και κυκλικά ανάλογα, καθώς και πεπτιδομιμητές της ανωτέρω ακολουθίας της A2 υπομονάδας, στοχεύοντας στην παρεμπόδιση της αλληλεπίδρασης μεταξύ των FVIIIa με FIXa,προκειμένου να ανασταλεί η διαδικασία ενεργοποίησης της παραγωγής θρομβίνης και της πήξης αίματος.)ς μέθοδος σύζευξης ακολουθείται η μεθοδολογία Fmoc/tBu επί της ρητίνης 2-χλωροτριτυλ-χλωρίδιο (2-CLTR) για συνθέσεις γραμμικών, πεπτιδομιμητικών αναλόγων πεπτιδίων οξέων αλλά και κυκλικών, καθώς και η MBHA Rink-amide ρητίνη για συνθέσεις αναλόγων πεπτιδίων αμιδίων σε στερεά φάση αλλά και η μεθοδολογία σύνθεσης πεπτιδίων και αναλόγων ενώσεων σε υγρή φάση. Τα συντεθέντα προϊόντα έχουν προσδιοριστεί (ΝΜR, RP-HPLC, ESI-MS κ.λπ.), ενώ παράλληλα έχουν εξεταστεί για τη βιολογική τους δράση